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我要吃西瓜

金虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 1094020
注册: 2010-09-09
性别: GG
专业: 生物信息学

[求助] PCR特异性问题求助

如题，最近在做分子克隆，根据一段序列设计了引物，使用反转录出来的cDNA作为模板，但是结果一直很不理想

做了一下温度梯度进行PCR，结果还是这样，求帮忙分析
一共是3对引物 marker使用的是DS2000

左右两边各位marker，中间每三个为一个温度，每个温度从左到右产物长度分别是400+，600+，200+

[ Last edited by 我要吃西瓜 on 2013-9-28 at 12:45 ]

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1楼 2013-09-28 12:41:03

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ndsc

铁虫 (初入文坛)

应助: 5 (幼儿园)
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专业: 植物学研究的新技术、新方

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-30 17:07:55
我要吃西瓜: 金币+3, ★有帮助 2013-10-01 06:16:22

我认为扩增成这样已经挺好了，你的目的是什么？？

肯定是得到目的片段啊，现在应该做的不是优化扩增体系，而是在现有的最好体系中回收目的片段。

有些时候做实验就是这样，有些本末倒置，回收好相应片段后回收纯化，浓度够的克隆或直接测序，不够的二扩一次接着克隆测序，效率很关键的，有结果才是最终目的，剩下的只是浮云。