应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助MSP凝胶电泳该如何选择
171/2返回列表12下一页
查看: 2454  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jmmchen

木虫 (正式写手)

[求助] 求助MSP凝胶电泳该如何选择 已有2人参与

请问大家有做甲基化特异性PCR的吗？？？
目前，我的研究课题是有关DNA甲基化的，经过PCR之后，我一般都是跑2%琼脂糖凝胶电泳，但最终结果一般会出现以下几个问题：
（1）对于我选择的目的基因，正常人的骨髓中应当是无甲基化的，文献报道正常人中应该没有甲基化。但我的电泳跑出来之后是有甲基化的。不知道是我的引物设计不合理，还是其他原因？？
（2）导师觉得我跑的条带不好看，希望改用PAGE凝胶进行电泳，我自认为这种办法不可取。不知道大家做甲基化PCR的，有用PAGE胶进行电泳的吗？？
如果有用PAGE胶的，请传授一下经验吧。
非常感谢！！！


[ 来自科研家族 生物医药家族 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

表观遗传

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
面朝大海，春暖花开
1楼 2012-05-16 19:23:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jmmchen

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by happyxiaoli at 2012-09-17 22:01:13
楼主，您好，方便留下个联系的邮箱吗？我也在做甲基化，遇到困难了，我是扩不出来条带，求交流。谢谢！

我的邮箱是j.mmchen@163.com，有问题可以给我发E-Mail。
赞一下(1人) 回复此楼
面朝大海，春暖花开
10楼2012-09-18 17:48:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

jmmchen

木虫 (正式写手)
竟然没有做的，好可怜呢
赞一下 回复此楼
面朝大海，春暖花开
2楼2012-05-20 23:19:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ADTechnology

捐助贵宾 (著名写手)

表观遗传学专业供应商

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-05-22 13:47:35
甲基化特异性PCR即MSP的方法，成功的关键是在引物的设计上面，不知您购买的相关的DNA甲基化修饰试剂盒是哪家公司的；同时，您可以通过调整引物设计来着手找问题，您是设计的一对甲基化引物和一对非甲基化引物吗？您使用的酶是哪家公司的，这也是一个关键的地方，主要是看此酶的特异性是否较高！
赞一下 回复此楼
3楼2012-05-22 09:53:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jmmchen

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ADTechnology at 2012-05-22 09:53:42:
甲基化特异性PCR即MSP的方法，成功的关键是在引物的设计上面，不知您购买的相关的DNA甲基化修饰试剂盒是哪家公司的；同时，您可以通过调整引物设计来着手找问题，您是设计的一对甲基化引物和一对非甲基化引物吗？您

您好，我用的DNA甲基化修饰试剂盒是INVITROGEN公司的EpiTect bisulfite kit，按操作流程修饰即可。通过甲基化引物设计软件设计一对甲基化引物和一对非甲基化引物。我不知道你用的缓冲液是不是Hermans buffer,我采用的是2 GoTaq green master mix，简单方便，扩增效率还是蛮高的。请你再指点一下吧，谢谢
赞一下 回复此楼
面朝大海，春暖花开
4楼2012-05-22 14:35:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ADTechnology

捐助贵宾 (著名写手)

表观遗传学专业供应商

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜: 金币+2, 鼓励下 2012-05-23 21:48:59
您说的这个产品应该不是INVITROGE公司的，应该是QIAGEN的吧！呵呵！一般情况下，按照操作流程进行操作不会有什么问题的。一般引物设计软件采用Methl primer就可以的。至于您说的这个酶（2 GoTaq green master mix）应该是Promega的。亚硫酸盐的修饰的盒子还可以，但是与这个酶的匹配性如何！您这边有没有使用这个酶跑出来的条带呢？有的话，可以发到我的信箱一份，我的信箱是：tech@aderr.com
赞一下 回复此楼
5楼2012-05-23 09:46:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jmmchen

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ADTechnology at 2012-05-23 09:46:51:
您说的这个产品应该不是INVITROGE公司的，应该是QIAGEN的吧！呵呵！一般情况下，按照操作流程进行操作不会有什么问题的。一般引物设计软件采用Methl primer就可以的。至于您说的这个酶（2 GoTaq green master mix）

谢谢您的帮助，您了解的还挺多的，我现在已经找到解决问题的突破口了，谢谢您的回复，好人！！哈哈哈
赞一下 回复此楼
面朝大海，春暖花开
6楼2012-05-23 21:40:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ADTechnology

捐助贵宾 (著名写手)
7楼2012-05-23 22:24:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jqzhu1998

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

MSP检测单个CpG位点，用于细胞系较好
如果你设计的引物与文献中报道的不一致，也就是说，你分析的单个CpG位点与文献中报道的位点不一致，这样的话，结果没有可比性，既然已经做了修饰，为什么不做BSP了？结果会更好，更有说服力。
赞一下 回复此楼
8楼2012-07-01 16:51:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happyxiaoli

铜虫 (小有名气)
楼主，您好，方便留下个联系的邮箱吗？我也在做甲基化，遇到困难了，我是扩不出来条带，求交流。谢谢！
赞一下 回复此楼
读书需用意，一字值千金！
9楼2012-09-17 22:01:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jmmchen 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 Ocx3OKOzGU4q 2026-08-03 7/350 2026-08-04 13:22 by jzdxtiUmJ6PL
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Ocx3OKOzGU4q 2026-08-03 6/300 2026-08-04 11:34 by MWRYsWbJw4DE
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 Ocx3OKOzGU4q 2026-08-03 7/350 2026-08-04 11:31 by MWRYsWbJw4DE
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 Ocx3OKOzGU4q 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:26 by MWRYsWbJw4DE
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 17/850 2026-08-04 09:46 by archvillain
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 f1dmPx051StA 2026-08-03 7/350 2026-08-04 09:31 by v1TJC4qJauAB
[博后之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 5/250 2026-08-04 09:27 by v1TJC4qJauAB
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 9/450 2026-08-04 09:17 by v1TJC4qJauAB
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 10/500 2026-08-04 09:15 by v1TJC4qJauAB
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 10/500 2026-08-04 08:05 by 88817753
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 13/650 2026-08-04 07:30 by k7OM8YghWbkC
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 6/300 2026-08-04 06:10 by k7OM8YghWbkC
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 6/300 2026-08-04 04:47 by k7OM8YghWbkC
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 7/350 2026-08-04 04:46 by k7OM8YghWbkC
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 8/400 2026-08-04 03:21 by k7OM8YghWbkC
[高分子] UV压敏胶开发 +3 ichall 2026-07-30 5/250 2026-08-03 14:40 by Sunrisepay
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +19 低垂的野花 2026-07-31 25/1250 2026-08-03 09:25 by gy116024
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +16 布布和一二 2026-07-30 22/1100 2026-08-03 09:20 by gy116024
[考博] 2027年申博 50+3 射雕英雄胜 2026-07-30 3/150 2026-08-02 09:36 by lfy8008
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液，是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭