24小时热门版块排行榜    

查看: 2554  |  回复: 16

jmmchen

木虫 (正式写手)

[求助] 求助MSP凝胶电泳该如何选择 已有2人参与

请问大家有做甲基化特异性PCR的吗???
目前,我的研究课题是有关DNA甲基化的,经过PCR之后,我一般都是跑2%琼脂糖凝胶电泳,但最终结果一般会出现以下几个问题:
(1)对于我选择的目的基因,正常人的骨髓中应当是无甲基化的,文献报道正常人中应该没有甲基化。但我的电泳跑出来之后是有甲基化的。不知道是我的引物设计不合理,还是其他原因??
(2)导师觉得我跑的条带不好看,希望改用PAGE凝胶进行电泳,我自认为这种办法不可取。不知道大家做甲基化PCR的,有用PAGE胶进行电泳的吗??
如果有用PAGE胶的,请传授一下经验吧。
非常感谢!!!


[ 来自科研家族 生物医药家族 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

表观遗传

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

面朝大海,春暖花开
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jmmchen

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by happyxiaoli at 2012-09-17 22:01:13
楼主,您好,方便留下个联系的邮箱吗?我也在做甲基化,遇到困难了,我是扩不出来条带,求交流。谢谢!

我的邮箱是j.mmchen@163.com,有问题可以给我发E-Mail。
面朝大海,春暖花开
10楼2012-09-18 17:48:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

jmmchen

木虫 (正式写手)

竟然没有做的,好可怜呢
面朝大海,春暖花开
2楼2012-05-20 23:19:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ADTechnology

捐助贵宾 (著名写手)

表观遗传学专业供应商


【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-05-22 13:47:35
甲基化特异性PCR即MSP的方法,成功的关键是在引物的设计上面,不知您购买的相关的DNA甲基化修饰试剂盒是哪家公司的;同时,您可以通过调整引物设计来着手找问题,您是设计的一对甲基化引物和一对非甲基化引物吗?您使用的酶是哪家公司的,这也是一个关键的地方,主要是看此酶的特异性是否较高!
3楼2012-05-22 09:53:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jmmchen

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ADTechnology at 2012-05-22 09:53:42:
甲基化特异性PCR即MSP的方法,成功的关键是在引物的设计上面,不知您购买的相关的DNA甲基化修饰试剂盒是哪家公司的;同时,您可以通过调整引物设计来着手找问题,您是设计的一对甲基化引物和一对非甲基化引物吗?您

您好,我用的DNA甲基化修饰试剂盒是INVITROGEN公司的EpiTect bisulfite kit,按操作流程修饰即可。通过甲基化引物设计软件设计一对甲基化引物和一对非甲基化引物。我不知道你用的缓冲液是不是Hermans buffer,我采用的是2 GoTaq green master mix,简单方便,扩增效率还是蛮高的。请你再指点一下吧,谢谢
面朝大海,春暖花开
4楼2012-05-22 14:35:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ADTechnology

捐助贵宾 (著名写手)

表观遗传学专业供应商


【答案】应助回帖

★ ★
西瓜: 金币+2, 鼓励下 2012-05-23 21:48:59
您说的这个产品应该不是INVITROGE公司的,应该是QIAGEN的吧!呵呵!一般情况下,按照操作流程进行操作不会有什么问题的。一般引物设计软件采用Methl primer就可以的。至于您说的这个酶(2 GoTaq green master mix)应该是Promega的。亚硫酸盐的修饰的盒子还可以,但是与这个酶的匹配性如何!您这边有没有使用这个酶跑出来的条带呢?有的话,可以发到我的信箱一份,我的信箱是:tech@aderr.com
5楼2012-05-23 09:46:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jmmchen

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by ADTechnology at 2012-05-23 09:46:51:
您说的这个产品应该不是INVITROGE公司的,应该是QIAGEN的吧!呵呵!一般情况下,按照操作流程进行操作不会有什么问题的。一般引物设计软件采用Methl primer就可以的。至于您说的这个酶(2 GoTaq green master mix)

谢谢您的帮助,您了解的还挺多的,我现在已经找到解决问题的突破口了,谢谢您的回复,好人!!哈哈哈
面朝大海,春暖花开
6楼2012-05-23 21:40:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ADTechnology

捐助贵宾 (著名写手)

7楼2012-05-23 22:24:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jqzhu1998

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

MSP检测单个CpG位点,用于细胞系较好
如果你设计的引物与文献中报道的不一致,也就是说,你分析的单个CpG位点与文献中报道的位点不一致,这样的话,结果没有可比性,既然已经做了修饰,为什么不做BSP了?结果会更好,更有说服力。
8楼2012-07-01 16:51:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happyxiaoli

铜虫 (小有名气)

楼主,您好,方便留下个联系的邮箱吗?我也在做甲基化,遇到困难了,我是扩不出来条带,求交流。谢谢!
读书需用意,一字值千金!
9楼2012-09-17 22:01:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jmmchen 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-30 19:48 by hZiFeudZyoGR
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-30 19:46 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 6/300 2026-08-30 19:13 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:50 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:40 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 18:18 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:07 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 17:47 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 11/550 2026-08-30 17:34 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-30 14:03 by GkCVyODlx4mR
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
请填处理意见