应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR标准曲线有问题 乱飞
51/1返回列表
查看: 4627  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

紫衫月影

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量PCR标准曲线有问题 乱飞

今天跑得标准曲线结果，大虾们看看是什么原因！
荧光定量PCR标准曲线有问题 乱飞
QQ截图20000825162720.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-08-25 16:32:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助！ 2013-08-26 18:36:40
熔解峰单一正常，说明引物没有问题，没有引物二聚体和非特异扩增。从扩增曲线上看，CT值偏小，说明模板浓度太高了。应该把模板稀释到CT值在15-30。扩增曲线的平台期荧光差别大，并且重复样品间不平行，很可能是移液操作的问题。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-08-25 23:28:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

qingyuansw20

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-25 22:37:55
紫衫月影: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢啦，我今天跑跑再试试 2013-08-26 11:04:16
1、从溶解曲线上看，都在一个点发生，排除了引物的问题。
2、不是引物问题就是楼主的加样方法有问题。
3、标准曲线的做法是以10倍作为稀释倍数进行，所以再加样时提高精确度，通常都是分装的办法。如：每个浓度做三个管，共做5个浓度，10倍稀释。则你要准备4个管的量。第一个最大浓度混合完毕后分装到体积相同三个管中，第四个管进行稀释，然后再分装。以此类推。
4、不论你怎么加样，一定要总的开始分的结束。
赞一下 回复此楼
2楼2013-08-25 18:50:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

紫衫月影

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by qingyuansw20 at 2013-08-25 18:50:33
1、从溶解曲线上看，都在一个点发生，排除了引物的问题。
2、不是引物问题就是楼主的加样方法有问题。
3、标准曲线的做法是以10倍作为稀释倍数进行，所以再加样时提高精确度，通常都是分装的办法。如：每个浓度做 ...

今天的结果，这又是怎么回事？R2=0.斜率=0~~~请教大侠
荧光定量PCR标准曲线有问题 乱飞-1
QQ截图20000826143753.png


荧光定量PCR标准曲线有问题 乱飞-2
QQ截图20000826143845.png
赞一下 回复此楼
4楼2013-08-26 14:42:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

紫衫月影

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-25 23:28:10
熔解峰单一正常，说明引物没有问题，没有引物二聚体和非特异扩增。从扩增曲线上看，CT值偏小，说明模板浓度太高了。应该把模板稀释到CT值在15-30。扩增曲线的平台期荧光差别大，并且重复样品间不平行，很可能是移液 ...

今天我跑了的结果，这又是怎么回事？R2=0.斜率=0~~~请教大侠
荧光定量PCR标准曲线有问题 乱飞-3
QQ截图20000826143753.png


荧光定量PCR标准曲线有问题 乱飞-4
QQ截图20000826143845.png
赞一下 回复此楼
5楼2013-08-26 14:43:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +7 Tide man 2026-08-10 8/400 2026-08-11 15:49 by 铁帽子农民
[论文投稿] 职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊 +3 工厂打螺丝 2026-08-08 3/150 2026-08-11 13:42 by 会议编辑
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 6/300 2026-08-11 13:19 by JACS/Angew
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] 帮忙看看fileCode +6 wwncly 2026-08-10 12/600 2026-08-11 13:01 by wwncly
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +5 布布和一二 2026-08-10 6/300 2026-08-11 10:15 by 医学老男孩
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭