应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR标准曲线有问题 乱飞
51/1返回列表
查看: 4719  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

紫衫月影

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量PCR标准曲线有问题 乱飞

今天跑得标准曲线结果，大虾们看看是什么原因！
荧光定量PCR标准曲线有问题 乱飞
QQ截图20000825162720.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-08-25 16:32:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

紫衫月影

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by qingyuansw20 at 2013-08-25 18:50:33
1、从溶解曲线上看，都在一个点发生，排除了引物的问题。
2、不是引物问题就是楼主的加样方法有问题。
3、标准曲线的做法是以10倍作为稀释倍数进行，所以再加样时提高精确度，通常都是分装的办法。如：每个浓度做 ...

今天的结果，这又是怎么回事？R2=0.斜率=0~~~请教大侠
荧光定量PCR标准曲线有问题 乱飞-1
QQ截图20000826143753.png


荧光定量PCR标准曲线有问题 乱飞-2
QQ截图20000826143845.png
赞一下 回复此楼
4楼2013-08-26 14:42:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

qingyuansw20

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-25 22:37:55
紫衫月影: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢啦，我今天跑跑再试试 2013-08-26 11:04:16
1、从溶解曲线上看，都在一个点发生，排除了引物的问题。
2、不是引物问题就是楼主的加样方法有问题。
3、标准曲线的做法是以10倍作为稀释倍数进行，所以再加样时提高精确度，通常都是分装的办法。如：每个浓度做三个管，共做5个浓度，10倍稀释。则你要准备4个管的量。第一个最大浓度混合完毕后分装到体积相同三个管中，第四个管进行稀释，然后再分装。以此类推。
4、不论你怎么加样，一定要总的开始分的结束。
赞一下 回复此楼
2楼2013-08-25 18:50:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助！ 2013-08-26 18:36:40
熔解峰单一正常，说明引物没有问题，没有引物二聚体和非特异扩增。从扩增曲线上看，CT值偏小，说明模板浓度太高了。应该把模板稀释到CT值在15-30。扩增曲线的平台期荧光差别大，并且重复样品间不平行，很可能是移液操作的问题。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-08-25 23:28:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

紫衫月影

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-25 23:28:10
熔解峰单一正常，说明引物没有问题，没有引物二聚体和非特异扩增。从扩增曲线上看，CT值偏小，说明模板浓度太高了。应该把模板稀释到CT值在15-30。扩增曲线的平台期荧光差别大，并且重复样品间不平行，很可能是移液 ...

今天我跑了的结果，这又是怎么回事？R2=0.斜率=0~~~请教大侠
荧光定量PCR标准曲线有问题 乱飞-3
QQ截图20000826143753.png


荧光定量PCR标准曲线有问题 乱飞-4
QQ截图20000826143845.png
赞一下 回复此楼
5楼2013-08-26 14:43:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +7 Isak0320 2026-10-12 10/500 2026-10-12 22:38 by 大飞鱼鱼鱼
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +6 13108017953 2026-10-08 6/300 2026-10-12 20:07 by w3w3y3
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +4 wangyl_123 2026-10-10 8/400 2026-10-12 18:09 by wangyl_123
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +3 好运来～9527 2026-10-10 6/300 2026-10-12 14:55 by 简单化xn
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭