| 查看: 4625 | 回复: 8 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
NdeI,BamHI双酶切
|
|||
| 我用NedI和BamHI双酶切我的目的片段然后和28a连接。试着改变了多次酶切酶连条件，但一直都转化不出来。28a切完后跑电泳与质粒比较应该是切开的。现在不知道问题到底是出在哪里了。求各位帮忙分析一下，可能的原因以及解决的方案吧~谢谢~~感激不尽！ |
回复此楼» 猜你喜欢
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有241人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有17人回复
-
散金
已经有60人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于双酶切作用时间
已经有10人回复
- 载体上临近的两个酶切位点可以设计起来做双酶切吗？
已经有12人回复
- 有关NEB内切酶NdeI和XhoI的双酶切问题
已经有6人回复
- 重组质粒单双酶切结果一样，奇怪了的……
已经有15人回复
- 双酶切没有切开，怎么回事啊
已经有6人回复
- 关于分步双酶切
已经有7人回复
- 目的片段中含有酶切位点，求解决方案
已经有3人回复
- 双酶切后载体片段变小
已经有8人回复
- 求助关于双酶切空载跑胶没有条带！
已经有15人回复
- Hind111 与 Not1双酶切请教 急急急！！！
已经有13人回复
- 双酶切看不到小片段，为什么？
已经有19人回复
- 关于EcoRI的部分酶切
已经有15人回复
- 表达载体双酶切
已经有9人回复
- 双酶切，体系，切不出来
已经有10人回复
- 重组质粒双酶切问题
已经有5人回复
- HindIII酶切基因组DNA
已经有4人回复
- 双酶切体系是什么意思
已经有7人回复
- 求助！请问 NdeI 和EcoRI 同时做酶切可以吗？
已经有3人回复
- 【求助/交流】BamHI酶切
已经有27人回复
- 【求助/交流】怎样才能把HINDIII marker跑好
已经有7人回复
|
1、用通用缓冲液进行双酶切，酶量不可太多，例如2~3mL培养过夜菌体，Kit提取质粒用40uLDDW洗脱下来，可加NdeI 2~3U，BamHI 1~2U,混匀后37℃，酶切1.5h即可，酶量不能太多，酶切时间不宜太长； 2、胶回收不要用低熔点琼脂糖，譬如用Agarose H，胶浓度用0.5%，胶长度~15~20cm(可将常用的两灌胶槽用胶带串接在一起)，准备冷冻的电极缓冲液中间更换缓冲液，或冻制缓冲冰块，中间加入冷却，电压用120~140V，电泳时间~1.5-2.5h,注意除了电Marker样品外，还带上未酶切的载体样作对比； 3、用常规胶回收试剂盒回收，熔胶稳定控制在50℃左右，6~10mins，柱中目标片段用30uL水洗脱下来，一定要电泳检视，取3~5ul点样，应该条带清晰，无降解和聚集等杂带； 4、待插入的双酶切目标基因按常规操作，最后回收样也要电泳检视质量可靠后，再与载体连接。 |
8楼2018-11-19 09:52:27
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24338.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
2楼2013-08-14 18:06:44
hermain
木虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 1765.5
- 帖子: 97
- 在线: 307.4小时
- 虫号: 1418365
- 注册: 2011-09-26
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2013-08-15 13:35:40
4楼2013-08-15 14:48:07
40