应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » NdeI,BamHI双酶切
51/1返回列表
查看: 4329  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

大脸猫猫喵

金虫 (初入文坛)

[求助] NdeI,BamHI双酶切

我用NedI和BamHI双酶切我的目的片段然后和28a连接。试着改变了多次酶切酶连条件，但一直都转化不出来。28a切完后跑电泳与质粒比较应该是切开的。现在不知道问题到底是出在哪里了。求各位帮忙分析一下，可能的原因以及解决的方案吧~谢谢~~感激不尽！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-08-14 17:19:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

RUI1990

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
大脸猫猫喵(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-08-15 16:53:58
既然切开了，那应该是酶连出了问题吧？看一下连接酶是否出了问题，很有可能是buffer出现沉淀，导致酶连效率降低。
赞一下 回复此楼
做自己
5楼2013-08-15 14:54:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
大脸猫猫喵: 金币+1, ★有帮助, 这个都是做过的，都是没有问题的~ 2013-08-14 18:25:09
有没有做阳性对照（转pET28a空载体）来排除你平板抗性没用错和感受态细胞良好
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-08-14 18:06:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hermain

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
大脸猫猫喵: 金币+1, ★有帮助, 我分步酶切试过的，但还是不行。我感觉可能是我的目的蛋白二级结构上的问题，但这方面我不懂，也不知道怎么样处理。 2013-08-15 13:54:49
目的片段切下来以后跑电泳看过了吗？有可能是双酶切不完全。NedI和BamHI双酶切的切割效率可能比较低，要不就用分步酶切的方法试一试。
赞一下 回复此楼
3楼2013-08-15 13:35:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cookee1981

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-15 16:47:25
gyesang: 回帖置顶 2013-08-15 16:47:37
gyesang: 很好的建议，楼主可以考虑 2013-08-15 16:53:39
你的目的片段是PCR产物还是已经连在了克隆载体上？如果是直接用PCR产物进行酶切，可能会比较困难，而且要看你有没有在酶切位点两端加上保护碱基。如果是从克隆载体上双酶切，那就要测序检查一下酶切位点是否为唯一的在目的片段两端。
赞一下 回复此楼
4楼2013-08-15 14:48:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 10/500 2026-03-19 16:05 by 余麟余
[考研] 271材料工程求调剂 +6 .6lL 2026-03-18 6/300 2026-03-19 15:41 by haoshis
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +10 慕寒mio 2026-03-16 10/500 2026-03-19 15:26 by 丁丁*
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] 287求调剂 +3 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-19 12:32 by peike
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-17 7/350 2026-03-18 20:41 by Wangjingyue
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 材料专硕326求调剂 +6 墨煜姒莘 2026-03-15 7/350 2026-03-17 17:10 by ruiyingmiao
[考研] 332求调剂 +6 Zz版 2026-03-13 6/300 2026-03-17 17:03 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +6 Losir 2026-03-12 7/350 2026-03-17 12:09 by danranxie
[考研] 302求调剂 +4 小贾同学123 2026-03-15 8/400 2026-03-17 10:33 by 小贾同学123
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化，一志愿：哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭