应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关嗜热蛋白纯化的问题
51/1返回列表
查看: 1106  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)

[求助] 有关嗜热蛋白纯化的问题

各位虫友：我现在在做蛋白纯化。
先介绍一下我的蛋白:我做的蛋白是一种嗜热蛋白，在100℃下还能保持很好的活性。所以就想通过煮蛋白的方式，使杂蛋白变性沉淀下去，而上清中只保留 我自己的目标蛋白。但是现在我不管怎么煮在距离目标蛋白很近的位置总有杂蛋白存在，怎么煮都煮不干净。我的宿主菌是大肠杆菌（rossetta），按说大肠杆菌是不会有嗜热的蛋白存在的，怎么会除不干净呢？有用过这种纯化蛋白的虫友 们能否借鉴一些纯化经验啊！小虫将不甚感激！
下面附纯化蛋白电泳图一张：
有关嗜热蛋白纯化的问题
纯化蛋白.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
nothing isimpossible
1楼 2013-07-27 21:10:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2013-07-28 22:42:16
建议加his-tag。单纯靠煮，重复性也不太好。我前几天刚做过一个嗜热酶。开始加N-标记的his-tag不挂柱，试图用煮的方法，可重复性不好。后来换成C-标记就ok了。

请问在加入his-tag后，在蛋白纯化后需要把his-tag切掉吗？
我之前也建议老师加his-tag，但是老师说这样纯化出来的蛋白就不是纯天然的蛋白了，可能会改变它的性质。
赞一下 回复此楼
nothing isimpossible
5楼2013-07-29 09:40:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hraikeyan(myprayer代发): 金币+1, 鼓励应助，热心的顾问分子生物期待更多精彩 2013-07-27 23:58:50
hraikeyan: 金币+3, ★★★很有帮助, 我的蛋白上没有标签，因为它是嗜热的想着煮一下就纯化干净了，所以没有加标签。我之前也跑过空大肠的，空大肠也是有这条条带的。 2013-07-28 09:14:53
确定下面的小带一定是杂蛋白吗？某些蛋白在SDS-PAGE上会跑出这样的带来，可能是蛋白有结合辅因或者有修饰造成迁移率不同。你的重组蛋白上有带标签吧，你可以做一下western检查是否两条带都是目的蛋白。
赞一下 回复此楼
2楼2013-07-27 23:25:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
hraikeyan(gyesang代发): 金币+2, 鼓励应助！ 2013-07-28 17:15:52
你指把空的大肠杆菌样品煮后也有这条带？那么说明可能是大肠杆菌本身有的耐热蛋白了。如果你要求样品很纯，可以试试盐析或者离子交换纯化。
赞一下 回复此楼
3楼2013-07-28 11:10:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hraikeyan: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-07-29 09:38:55
建议加his-tag。单纯靠煮，重复性也不太好。我前几天刚做过一个嗜热酶。开始加N-标记的his-tag不挂柱，试图用煮的方法，可重复性不好。后来换成C-标记就ok了。
赞一下 回复此楼
4楼2013-07-28 22:42:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +4 苦命人。。。 2026-04-18 4/200 2026-04-19 02:01 by 烟雨流涯
[考研] 材料相关专业344求调剂双非工科学校或课题组 +25 hualkop 2026-04-12 27/1350 2026-04-19 01:58 by 烟雨流涯
[考研] 300求调剂 +12 橙a777 2026-04-15 12/600 2026-04-18 23:51 by 路病情
[考研] 生物学调剂 +10 纸扇zhishan 2026-04-13 10/500 2026-04-18 21:19 by zqndavala
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[考研] 急需调剂 +9 绝不放弃22 2026-04-15 10/500 2026-04-18 08:09 by chixmc
[考博] 求博导｜生物质基多孔碳/超级电容方向，已有相关成果，寻能源材料/碳材料方向老师 +3 猪猪人Zzz 2026-04-12 3/150 2026-04-17 19:10 by 阳阳阳^_^
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀，最好在一个月之内的，研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 5/250 2026-04-17 10:02 by bobvan
[考研] 322求调剂 +8 123安康 2026-04-12 15/750 2026-04-16 11:07 by Espannnnnol
[考研] 327求调剂 +26 Xxjc1107. 2026-04-13 29/1450 2026-04-16 10:52 by Espannnnnol
[考研] 求调剂推荐 +8 小聂爱学习 2026-04-14 8/400 2026-04-16 07:22 by 学员JpLReM
[考研] 各位老师好，求调剂，本科211，一志愿天津大学生物与医药学硕，差两名录取。 +11 路六六jjj 2026-04-13 11/550 2026-04-14 16:01 by zs92450
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
[考研] 085600材料与化工349分求调剂 +16 李木子啊哈哈 2026-04-12 17/850 2026-04-14 09:11 by fenglj492
[考研] 2026硕士调剂_能动_河南农业大学 +4 河南农业大学-能 2026-04-12 4/200 2026-04-13 22:01 by bljnqdcc
[考研] B区0809 ，数一英一，290 求调剂 +3 泠潍1111 2026-04-12 4/200 2026-04-13 20:35 by 学员JpLReM
[考研] 一志愿085802 323分求调剂 +13 drizzle_9 2026-04-12 14/700 2026-04-13 10:26 by Faiz5552
[考研] 。 +10 李多米lee. 2026-04-12 11/550 2026-04-12 22:58 by yuyin1233
[考研] 一志愿浙大生物325分求调剂 +9 zysheng 2026-04-12 9/450 2026-04-12 22:31 by yuyin1233
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭