24小时热门版块排行榜    

查看: 3167  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

达菲鸭

新虫 (初入文坛)

[求助] 提取的RNA样本,经过DNA酶处理,但总是处理不干净

我们用qiagen的试剂盒提取了弧菌的RNA,然后用fermentas的cDNA试剂盒里面的DNA酶和buffer来去除gDNA。但是处理后的RNA经PCR检测竟然还是P出了目的产物,这会影响后面的qPCR。

我们以前做过几次,没有遇到这个问题啊,以前都是P不出来的。

可能是RNA的样品中的杂质影响了dna酶的工作么?因为我们后来换了一家的国产的试剂盒同样没有处理干净。这一次提的RNA,有几管的260/280,260/230都在2.1在2.1左右,应该还比较纯吧,但也还是除不干净DNA。

有没有谁知道是什么原因吗?求赐教,十分感谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

达菲鸭

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by longrna at 2013-07-23 08:27:54
其实是很容易P出来的。
可以试一下分两次加DNase (先正常消化,然后再加再消化一次。)
另外也可以尝试换life(ambion)的DNase 酶。

对了,分两次消化有什么好处呢?
10楼2013-07-24 14:05:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-07-21 23:10:07
可能是样品太多,酶加少了。DNase消化要根据样品的量来做,可以参考酶的说明书。
2楼2013-07-21 14:23:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yilunanxia

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
达菲鸭(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩。 2013-07-22 20:10:37
PCR出了目标条带就是说你的RNA里有DNA了,加大DNase吧
3楼2013-07-21 16:07:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

达菲鸭

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-21 14:23:56
可能是样品太多,酶加少了。DNase消化要根据样品的量来做,可以参考酶的说明书。

啊,fermentas的试剂盒说的是1μg的RNA不要使用超过1个单位的DNA酶,然后我就是按这个量加的。难道应该把酶的量再加大一些吗?
4楼2013-07-21 18:15:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 72/3600 2026-08-16 13:15 by 医学老男孩
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见