应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取的RNA样本，经过DNA酶处理，但总是处理不干净
51/1返回列表
查看: 2560  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

达菲鸭

新虫 (初入文坛)

[求助] 提取的RNA样本，经过DNA酶处理，但总是处理不干净

我们用qiagen的试剂盒提取了弧菌的RNA，然后用fermentas的cDNA试剂盒里面的DNA酶和buffer来去除gDNA。但是处理后的RNA经PCR检测竟然还是P出了目的产物，这会影响后面的qPCR。

我们以前做过几次，没有遇到这个问题啊，以前都是P不出来的。

可能是RNA的样品中的杂质影响了dna酶的工作么？因为我们后来换了一家的国产的试剂盒同样没有处理干净。这一次提的RNA，有几管的260/280,260/230都在2.1在2.1左右，应该还比较纯吧，但也还是除不干净DNA。

有没有谁知道是什么原因吗？求赐教，十分感谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-07-21 13:10:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-07-23 11:09:53
达菲鸭: 金币+14, ★有帮助, 4 2013-07-24 13:10:13
其实是很容易P出来的。
可以试一下分两次加DNase （先正常消化，然后再加再消化一次。）
另外也可以尝试换life(ambion)的DNase 酶。
赞一下 回复此楼
伟大航线....
8楼2013-07-23 08:27:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-21 23:10:07
可能是样品太多，酶加少了。DNase消化要根据样品的量来做，可以参考酶的说明书。
赞一下 回复此楼
2楼2013-07-21 14:23:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yilunanxia

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
达菲鸭(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩。 2013-07-22 20:10:37
PCR出了目标条带就是说你的RNA里有DNA了，加大DNase吧
赞一下 回复此楼
3楼2013-07-21 16:07:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

达菲鸭

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-21 14:23:56
可能是样品太多，酶加少了。DNase消化要根据样品的量来做，可以参考酶的说明书。

啊，fermentas的试剂盒说的是1μg的RNA不要使用超过1个单位的DNA酶，然后我就是按这个量加的。难道应该把酶的量再加大一些吗？
赞一下 回复此楼
4楼2013-07-21 18:15:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭