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[求助]
扩增一个基因
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http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/BT017850 链接里的这个基因是blast出来的，但是引物设计了多次了，都没有扩出来，不知道是怎么回事，是不是这段序列本身就是错误的呢？ 求高人指点，小弟不胜感激。 |
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【答案】应助回帖
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-07-15 20:20:47
1949stone: 回帖置顶 2013-07-16 08:14:11
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1949stone: 回帖置顶 2013-07-16 08:14:11
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序列不会是错误的，可能您的序列和链接中的序列有些差异，但一般库里公布的序列是没有问题的，因此建议您从模板，引物，PCR反应体系上找原因：1模板的质量，最好扩增之前跑一下模板，对模板的质量包括浓度和纯度有个大概了解。 2引物设计是否合理，包括GC含量，TM值等，一般GC含量在40-60%，TM在55-65度比较好，2个引物的TM值还不能差异太大，另外还要注意设计引物注意避开发夹结构，二聚体，碱基错配等。 3 PCR体系一般不会有问题，模板质量不好多加一些，质量好稀释少加些。 4 退火温度梯度实验。 |
4楼2013-07-15 15:50:52
10楼2013-07-16 00:37:21
2楼2013-07-15 09:55:01
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