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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zw198626

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 请教一个基因的扩增,TA克隆问题

各位大侠,
小弟最近在用mRNA扩增一个基因,跑胶后电泳带子特异。直接用PCR产物未经纯化或切胶纯化直接做TA克隆。抽提转化子的质粒,跑胶将变大的质粒送测序。但是得到的连接产物,经测序发现大小正确,但是序列为一段没有任何意义的DNA序列。在NCBI做blast也找不到任何匹配的序列。不知各位有没有这样的经历?或有大侠给指点下迷津的?

再次拜谢!
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ivxy

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 有道理 2012-02-03 13:39:44
zw198626: 金币+10, 有帮助 2012-04-28 09:33:07
1、非编码区
2、扩到内含子序列
3、基因在该段的变异大,不同物种的该基因差异也比较大
4、PCR扩增中的错配
2楼2012-02-03 11:08:02
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
小丹木木(金币+2, 专家考核): 运气还不错了。仰慕ing 2012-02-03 13:41:09
昨天拿到的测序结果也是这样,克隆的是植物的基因,连到载体上后,用M13f测得结果,blast得到的是大肠杆菌的细胞分裂基因序列!!还好有一个正确的!!
jiayoubashaonian
3楼2012-02-03 11:14:05
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cgspider

木虫 (正式写手)

碰到过,提交后说是genbank里 没有相似序列。。。
你的能力撑不起你的野心
4楼2012-02-06 16:15:32
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zw198626

铁杆木虫 (小有名气)

各位,除了多挑克隆测序外还有什么好的解决办法么?
5楼2012-02-08 10:27:39
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笑看人生417

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励新虫回帖应助 2012-02-20 16:40:31
这是假阳性,很正常。克服假阳性的方法,连接产物的浓度和比例把握好,再者可以进行蓝白斑筛选,跑胶时多挑些菌,只挑最亮的测序,希望能帮到你呵呵
6楼2012-02-20 15:32:42
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137167741

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+1): 有道理啊 2012-02-22 18:44:21
所以每次测序一定要2~3个平行样,这样才不至于是不知道是因为测序问题,还是因为自己的PCR的问题。
总有一天我要修改用户名。
7楼2012-02-22 16:10:20
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