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转化之前如何验证连接是否成功 已有11人参与
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| 将双酶切的目的片段与双酶切的载体进行连接，在转化之前，怎么判断有没有连起来？跑胶验证可以吗？ |
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不是啦，空载体理论上是不会长斑的，因为被切开的载体是不能表达的，所以在抗性板上长不了。但是如果酶切不完全，或者载体有自连，那就也能长斑。 楼主想知道连接、转化的效果好不好，那就应该做个空白对照。也就是在你连接的时候，同时做一管只加载体不加外源片段的连接，转化的时候也拿这管空载体的连接产物去做转化。正常情况下空白对照的板长出来的菌应该很少，起码要明显比实验组少。如果空白对照的板都长了一堆，那最好不要往下筛了，重新酶切载体、连接、转化。硬要往下做的话，做好心理准备，因为大部分菌斑是阴性的。 如果想减少自连，可以在酶切了载体之后，对载体去磷。 |
8楼2013-07-12 21:37:33
西瓜
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