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易翔仪冲

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[交流] 转化之前如何验证连接是否成功已有11人参与

将双酶切的目的片段与双酶切的载体进行连接，在转化之前，怎么判断有没有连起来？跑胶验证可以吗？

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1楼 2013-07-12 14:39:14

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西瓜

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1949stone: 回帖置顶 2013-07-17 11:08:36

不是啦，空载体理论上是不会长斑的，因为被切开的载体是不能表达的，所以在抗性板上长不了。但是如果酶切不完全，或者载体有自连，那就也能长斑。
楼主想知道连接、转化的效果好不好，那就应该做个空白对照。也就是在你连接的时候，同时做一管只加载体不加外源片段的连接，转化的时候也拿这管空载体的连接产物去做转化。正常情况下空白对照的板长出来的菌应该很少，起码要明显比实验组少。如果空白对照的板都长了一堆，那最好不要往下筛了，重新酶切载体、连接、转化。硬要往下做的话，做好心理准备，因为大部分菌斑是阴性的。
如果想减少自连，可以在酶切了载体之后，对载体去磷。