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grape_vine

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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9楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-07-12 22:09:14
可以使用质谱对于认为连接好的质粒检测相对分子量,参考对对未连接的质粒和需要连接的DNA片段的相对分子量。

无疑冒犯,怎么感觉驴价比马价大阿
11楼2013-07-13 20:12:54
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grape_vine

金虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by yb19841014 at 2013-07-13 20:03:06
可以跑胶看的。要看你的插入片段大小了。如果是500bp以上的,是能看到比载体质粒高一些的

有没有亲自做过吗? 这个可能性基本上没有吧
12楼2013-07-13 20:14:10
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by grape_vine at 2013-07-13 20:14:10
有没有亲自做过吗? 这个可能性基本上没有吧...

做过的啊 。连接的产物就是比载体要高一点的。我是用T4连的啊
13楼2013-07-13 22:16:58
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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11楼: Originally posted by grape_vine at 2013-07-13 20:12:54
无疑冒犯,怎么感觉驴价比马价大阿 ...

当然可以做凝胶检测,不过凝胶有时精度达不到。
14楼2013-07-13 23:02:29
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grape_vine

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
13楼: Originally posted by yb19841014 at 2013-07-13 22:16:58
做过的啊 。连接的产物就是比载体要高一点的。我是用T4连的啊...

真的啊? 我总感觉这个效率应该达不到凝胶可以检测的水平。我能看看你的图吗?
15楼2013-07-13 23:27:36
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grape_vine

金虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-07-13 23:02:29
当然可以做凝胶检测,不过凝胶有时精度达不到。...

呵呵 应该是pcr最合适了,其他的我都没试过,而且我连pcr都没做过,都是直接做转化的
16楼2013-07-13 23:28:46
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
16楼: Originally posted by grape_vine at 2013-07-13 23:28:46
呵呵 应该是pcr最合适了,其他的我都没试过,而且我连pcr都没做过,都是直接做转化的...

转化完成,用化学法,sanger 法,PCR法测序很方便就能知道有没有连接成功。因为我想很多人都会提供这个答案,我就没有说出此答案。
17楼2013-07-14 00:06:41
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370769676

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
被切开的质粒是不会扩增的!
18楼2013-07-14 16:32:24
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
线状DNA不能用PCR扩增?
19楼2013-07-14 18:18:28
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易翔仪冲

新虫 (初入文坛)

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8楼: Originally posted by 西瓜 at 2013-07-12 21:37:33
不是啦,空载体理论上是不会长斑的,因为被切开的载体是不能表达的,所以在抗性板上长不了。但是如果酶切不完全,或者载体有自连,那就也能长斑。
楼主想知道连接、转化的效果好不好,那就应该做个空白对照。也就是 ...

好的,谢谢!
20楼2013-07-14 19:47:47
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