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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化之前如何验证连接是否成功
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grape_vine

金虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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9楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-07-12 22:09:14
可以使用质谱对于认为连接好的质粒检测相对分子量，参考对对未连接的质粒和需要连接的DNA片段的相对分子量。

无疑冒犯,怎么感觉驴价比马价大阿
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11楼2013-07-13 20:12:54
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grape_vine

金虫 (小有名气)
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10楼: Originally posted by yb19841014 at 2013-07-13 20:03:06
可以跑胶看的。要看你的插入片段大小了。如果是500bp以上的，是能看到比载体质粒高一些的

有没有亲自做过吗? 这个可能性基本上没有吧
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12楼2013-07-13 20:14:10
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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12楼: Originally posted by grape_vine at 2013-07-13 20:14:10
有没有亲自做过吗? 这个可能性基本上没有吧...

做过的啊 。连接的产物就是比载体要高一点的。我是用T4连的啊
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13楼2013-07-13 22:16:58
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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11楼: Originally posted by grape_vine at 2013-07-13 20:12:54
无疑冒犯,怎么感觉驴价比马价大阿 ...

当然可以做凝胶检测，不过凝胶有时精度达不到。
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14楼2013-07-13 23:02:29
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grape_vine

金虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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13楼: Originally posted by yb19841014 at 2013-07-13 22:16:58
做过的啊 。连接的产物就是比载体要高一点的。我是用T4连的啊...

真的啊？ 我总感觉这个效率应该达不到凝胶可以检测的水平。我能看看你的图吗？
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15楼2013-07-13 23:27:36
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grape_vine

金虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-07-13 23:02:29
当然可以做凝胶检测，不过凝胶有时精度达不到。...

呵呵 应该是pcr最合适了，其他的我都没试过，而且我连pcr都没做过，都是直接做转化的
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16楼2013-07-13 23:28:46
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
16楼: Originally posted by grape_vine at 2013-07-13 23:28:46
呵呵 应该是pcr最合适了，其他的我都没试过，而且我连pcr都没做过，都是直接做转化的...

转化完成，用化学法，sanger 法，PCR法测序很方便就能知道有没有连接成功。因为我想很多人都会提供这个答案，我就没有说出此答案。
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17楼2013-07-14 00:06:41
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370769676

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
被切开的质粒是不会扩增的！
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18楼2013-07-14 16:32:24
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
线状DNA不能用PCR扩增？
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19楼2013-07-14 18:18:28
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易翔仪冲

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 西瓜 at 2013-07-12 21:37:33
不是啦，空载体理论上是不会长斑的，因为被切开的载体是不能表达的，所以在抗性板上长不了。但是如果酶切不完全，或者载体有自连，那就也能长斑。
楼主想知道连接、转化的效果好不好，那就应该做个空白对照。也就是 ...

好的，谢谢！
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20楼2013-07-14 19:47:47
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