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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化之前如何验证连接是否成功
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yb19841014

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15楼: Originally posted by grape_vine at 2013-07-13 23:27:36
真的啊？ 我总感觉这个效率应该达不到凝胶可以检测的水平。我能看看你的图吗？...

前面的泳道就是加了T4后的结果，会有很多条带。
转化之前如何验证连接是否成功
20130418 T4 puc19.jpg
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21楼2013-07-15 10:32:22
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grape_vine

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21楼: Originally posted by yb19841014 at 2013-07-15 10:32:22
前面的泳道就是加了T4后的结果，会有很多条带。

20130418 T4 puc19.jpg
...

能解释的清楚一点吗?后面那些亮的带是对照？
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22楼2013-07-15 12:02:04
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yb19841014

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22楼: Originally posted by grape_vine at 2013-07-15 12:02:04
能解释的清楚一点吗?后面那些亮的带是对照？...

后面的是对照 。前面是加了T4酶的，会看见很多条条带。
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23楼2013-07-15 16:41:38
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hyphen007

金虫 (小有名气)
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对，同意10楼，跑胶可以的，这貌似叫做连接效率检测啊
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24楼2013-07-15 19:32:37
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grape_vine

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23楼: Originally posted by yb19841014 at 2013-07-15 16:41:38
后面的是对照 。前面是加了T4酶的，会看见很多条条带。...

我自己还真没做过,我们每次连接就做5ul的体系,舍不得跑胶,呵呵,这个确实是比较明显的结果,连接效率也很高.可以作为大家的参考
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25楼2013-07-15 21:46:39
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xiaohaixie

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8楼: Originally posted by 西瓜 at 2013-07-12 21:37:33
不是啦，空载体理论上是不会长斑的，因为被切开的载体是不能表达的，所以在抗性板上长不了。但是如果酶切不完全，或者载体有自连，那就也能长斑。
楼主想知道连接、转化的效果好不好，那就应该做个空白对照。也就是 ...

想请教个问题，双酶切质粒一直切不开，Ecorl 和Xhol 酶切位点，每次都有两条带，都是5000往上，我的片段是900的，怎么回事啊
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Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
26楼2013-07-17 10:37:56
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shanqian1988

铜虫 (小有名气)
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多连接一些，可以电泳看出来的
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27楼2013-07-17 11:01:44
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pangyu716

禁虫 (初入文坛)
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28楼2013-07-18 16:54:52
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