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33ggdf

新虫 (小有名气)

[求助] 很奇怪的酶切连接问题

我分别双酶切表达载体和T-载体,再分别回收目的片段(16000bp和1100bp),在连接热击转化,挑取单克隆,pcr验证,挑阳性测序,测序结果正确(因为表达载体没有通用引物,所以就用的自己的目的片段的引物测序,据师兄说这样测序开头和结尾是不准确的,中间的序列才有说服力,测序的结果表明中间的序列确实是我目的片段上的序列,因此我觉得我连接成功了,这样理解不知对不对?),可奇怪的是:我再双酶切重组质粒时却切不下来了,试了好几次,也试着改变酶切体系,可还是不行,没有目的条带,只有质粒一条带,求解。。。。。。。。
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flyy1986

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物版块 期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-01 11:23:29
测序结果能找到酶切位点么?或者试试其他的酶。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-06-30 23:26:52
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bleach060452

新虫 (小有名气)

质粒的一条带是线性,还是环?
岂能尽如人意,但求无愧我心
2楼2013-06-30 14:54:05
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透明的玻璃杯

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
33ggdf: 金币+3 2013-07-01 11:20:00
重新测序一下,表达载体没有引物就合成一下也很快的。
皇帝诞生地
3楼2013-06-30 21:01:26
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币-1, 应助指数-1, 与应助无关的内容,请勿点击应助按钮,否则一律视为刷应助指数。分子生物期待你的积极交流 2013-07-01 11:23:04
33ggdf(myprayer代发): 金币+1, 再三斟酌,此贴回复还是缺少一点实质性的东西,zhlf1989513能补充相关的应助信息则最好不过了,分子生物版块期待你的积极交流 2013-07-01 11:25:47
这个问题我也遇见过,不知道楼主解决否?可否讨教下~~~
keepon
5楼2013-07-01 08:00:18
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