应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 很奇怪的酶切连接问题
51/1返回列表
查看: 2641  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

33ggdf

新虫 (小有名气)

[求助] 很奇怪的酶切连接问题

我分别双酶切表达载体和T-载体，再分别回收目的片段（16000bp和1100bp），在连接热击转化，挑取单克隆，pcr验证，挑阳性测序，测序结果正确（因为表达载体没有通用引物，所以就用的自己的目的片段的引物测序，据师兄说这样测序开头和结尾是不准确的，中间的序列才有说服力，测序的结果表明中间的序列确实是我目的片段上的序列，因此我觉得我连接成功了，这样理解不知对不对？），可奇怪的是：我再双酶切重组质粒时却切不下来了，试了好几次，也试着改变酶切体系，可还是不行，没有目的条带，只有质粒一条带，求解。。。。。。。。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-06-30 14:43:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

透明的玻璃杯

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
33ggdf: 金币+3 2013-07-01 11:20:00
重新测序一下，表达载体没有引物就合成一下也很快的。
赞一下 回复此楼
皇帝诞生地
3楼2013-06-30 21:01:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

bleach060452

新虫 (小有名气)
质粒的一条带是线性，还是环？
赞一下 回复此楼
岂能尽如人意，但求无愧我心
2楼2013-06-30 14:54:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flyy1986

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物版块 期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-01 11:23:29
测序结果能找到酶切位点么？或者试试其他的酶。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2013-06-30 23:26:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhlf1989513

金虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币-1, 应助指数-1, 与应助无关的内容，请勿点击应助按钮，否则一律视为刷应助指数。分子生物期待你的积极交流 2013-07-01 11:23:04
33ggdf(myprayer代发): 金币+1, 再三斟酌，此贴回复还是缺少一点实质性的东西，zhlf1989513能补充相关的应助信息则最好不过了，分子生物版块期待你的积极交流 2013-07-01 11:25:47
这个问题我也遇见过，不知道楼主解决否？可否讨教下~~~
赞一下 回复此楼
keepon
5楼2013-07-01 08:00:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭