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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 很奇怪的酶切连接问题
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33ggdf

新虫 (小有名气)

[求助] 很奇怪的酶切连接问题

我分别双酶切表达载体和T-载体，再分别回收目的片段（16000bp和1100bp），在连接热击转化，挑取单克隆，pcr验证，挑阳性测序，测序结果正确（因为表达载体没有通用引物，所以就用的自己的目的片段的引物测序，据师兄说这样测序开头和结尾是不准确的，中间的序列才有说服力，测序的结果表明中间的序列确实是我目的片段上的序列，因此我觉得我连接成功了，这样理解不知对不对？），可奇怪的是：我再双酶切重组质粒时却切不下来了，试了好几次，也试着改变酶切体系，可还是不行，没有目的条带，只有质粒一条带，求解。。。。。。。。
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1楼 2013-06-30 14:43:41
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水水613

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

会不会是酶切位点甲基化，实验室有人出现类似情况

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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10楼2013-07-04 14:18:13
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bleach060452

新虫 (小有名气)
质粒的一条带是线性，还是环？
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岂能尽如人意，但求无愧我心
2楼2013-06-30 14:54:05
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透明的玻璃杯

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
33ggdf: 金币+3 2013-07-01 11:20:00
重新测序一下，表达载体没有引物就合成一下也很快的。
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皇帝诞生地
3楼2013-06-30 21:01:26
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flyy1986

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物版块 期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-01 11:23:29
测序结果能找到酶切位点么？或者试试其他的酶。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2013-06-30 23:26:52
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