| 查看: 3163 | 回复: 12 | ||
[求助]
如何做2个定点突变（2个终止密码子换掉）
|
|
读文献有几个问题不太懂，特向各位大神求助 有一段目的基因待表达 (支原体的一段基因，要在大肠杆菌中表达），表达前要把这段基因的2个终止密码子换掉，文献中用了3对引物（1对flanking region引物，2对含有mutation引物--每对引物都是overlap的），我的问题是这两个定点突变是怎么做的？ 希望大神们帮帮忙，小女子拜谢 附上那篇文献 |
回复此楼» 本帖附件资源列表
-
欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : RGD_Motif_of_Lipoprotein_T,_Involved_in_Adhesion_of_Mycoplasma_conjunctivae_to_Lamb_Synovial_Tissue_Cells__†_-_副本.pdf
2013-06-15 18:52:22, 402.03 K
» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有131人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请教定点突变的突变点如何选取
已经有3人回复
- 求基因位点定点突变的方法
已经有11人回复
- 关于定点突变中，突变氨基酸的选择原则
已经有8人回复
- DpnI 酶消化不了模板，求解。
已经有9人回复
- 求助质粒模板制备的最正确方法
已经有6人回复
- 我做的定点突变一个位点，PCR无条带。。求高人指点。。
已经有9人回复
- 定点突变，请教
已经有6人回复
- 亲们，你们做定点突变么？
已经有31人回复
- 定点突变后转化，提质粒提不出来，求亲们帮帮忙
已经有3人回复
- 本人最近在做定点突变相关内容，求部分重叠引物设计方法
已经有10人回复
- 定点突变位置的确定
已经有6人回复
- 酶分子改造-定点突变交流
已经有4人回复
- 定点突变引物设计
已经有8人回复
- 定点突变最多能够突变多少相连的核苷酸残基?
已经有6人回复
- 定点突变出酶切之后出问题求助！！！急 求高手
已经有9人回复
- 【求助/交流】定点突变方法突变位点的确定
已经有8人回复
- 【求助/交流】定点突变试剂盒
已经有13人回复
- 【求助/交流】定点突变-DpnI消化
已经有12人回复
- 【求助/交流】定点突变PCR后加DPN1酶的作用
已经有4人回复
- 【求助/交流】扩的片段发生突变了 怎么再突变回来
已经有14人回复
sun_in_night
木虫 (小有名气)
- 应助: 51 (初中生)
- 金币: 1706.7
- 红花: 11
- 帖子: 171
- 在线: 123.1小时
- 虫号: 1494034
- 注册: 2011-11-16
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
2楼2013-06-15 21:05:49
3楼2013-06-15 21:23:56
|
我也不清楚这叫不叫定点突变，就是想把两个不同位置的终止密码子换掉，文献中给的两对引物是overlap的，但是文献中引用的文献9，我看不出有什么关联。。。 再附上文献9，求大神指导，小女子不胜感激 |
» 本帖附件资源列表
-
欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : PaperforQuestion9.pdf
2013-06-15 21:35:59, 3.48 M
4楼2013-06-15 21:36:14
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
16srDNA(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-06-16 10:42:46
感谢参与，应助指数 +1
16srDNA(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-06-16 10:42:46
|
我说下我大概浏览后对图1突变方法的理解，，结合问题回答，看能不能帮助你解决你的问题。 为了把在大肠杆菌是终止密码子而在来源生物是翻译为谷氨酰胺的密码子TAA突变为CAA，美国TAA位置应该都会设计一条引物，另外在质粒其他有单一限制性内切酶识别位点的位置突变成另一种限制性内切酶。亲本质粒和突变引物变性退火延伸扩增。扩增产物用内切酶把退火成亲本质粒（没有搭上突变引物扩增的原始质粒）先切开，转化，切开的亲本质粒将不会复制，而一条链是亲本一条链是突变引物扩增的将会在繁殖扩增过程形成带有两条链相同的突变质粒或原始质粒。提取质粒，再次酶切，把原始质粒切开，留下突变质粒，再次转化，提取质粒，这次可以应该大多数是突变了的。再用突变形成的新内切酶位点进行鉴定。 |
5楼2013-06-16 00:35:22
6楼2013-06-16 01:22:55
sun_in_night
木虫 (小有名气)
- 应助: 51 (初中生)
- 金币: 1706.7
- 红花: 11
- 帖子: 171
- 在线: 123.1小时
- 虫号: 1494034
- 注册: 2011-11-16
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
7楼2013-06-16 01:58:49
8楼2013-06-16 08:39:45
shanqian1988
铜虫 (小有名气)
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 233.5
- 帖子: 85
- 在线: 62.4小时
- 虫号: 2465276
- 注册: 2013-05-15
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
9楼2013-06-17 10:15:08
yujitianqing
铁虫 (正式写手)
- 应助: 19 (小学生)
- 金币: 3568.3
- 散金: 100
- 红花: 4
- 帖子: 415
- 在线: 444.7小时
- 虫号: 1948377
- 注册: 2012-08-20
- 专业: 生物大分子结构与功能
10楼2013-06-17 11:32:20
