| 查看: 1106 | 回复: 3 | ||
[求助]
定点突变后转化，提质粒提不出来，求亲们帮帮忙
|
|
亲们，帮帮忙！ 我现在在做点突变，PCR有条带，就做了转化，涂了几个板，过夜培养，有一个板长得很好，其他的长得不是很好，就培养了将近15个多小时，然后挑十几个菌摇，菌体都可以生长，提质粒后跑电泳却只有一两个有条带；比较土的方法（自己配置溶液提质粒）和试剂盒体质粒都用了，做了很多的无用功，想问一下这是怎么回事，亲们做这种实验也遇到过类似的状况吗？！着急啊亲们，还请高手多多指教啊！万分感谢！ 转化是通用的方法，取了6μl的PCR产物加入到70μl的感受态中，冰浴30min，热激90s，冰浴3min，然后用温浴的无抗LB复苏一个半小时，5000r离心2min，然后涂在含有Kna抗生素的LB板上，过夜培养！说明书上是要求热激30s，做了两次不行，就做了对照，然后还是选择了90s！ 摇菌时用的液体培养基也是含有卡纳抗生素的！ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有172人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 纸上谈药，一个畅销药的奋斗史（4）
已经有6人回复
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
2楼2012-10-21 13:28:06
|
本帖内容被屏蔽 |
3楼2012-10-21 18:43:40
4楼2012-11-19 11:13:13