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定点突变后转化，提质粒提不出来，求亲们帮帮忙
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亲们，帮帮忙！ 我现在在做点突变，PCR有条带，就做了转化，涂了几个板，过夜培养，有一个板长得很好，其他的长得不是很好，就培养了将近15个多小时，然后挑十几个菌摇，菌体都可以生长，提质粒后跑电泳却只有一两个有条带；比较土的方法（自己配置溶液提质粒）和试剂盒体质粒都用了，做了很多的无用功，想问一下这是怎么回事，亲们做这种实验也遇到过类似的状况吗？！着急啊亲们，还请高手多多指教啊！万分感谢！ 转化是通用的方法，取了6μl的PCR产物加入到70μl的感受态中，冰浴30min，热激90s，冰浴3min，然后用温浴的无抗LB复苏一个半小时，5000r离心2min，然后涂在含有Kna抗生素的LB板上，过夜培养！说明书上是要求热激30s，做了两次不行，就做了对照，然后还是选择了90s！ 摇菌时用的液体培养基也是含有卡纳抗生素的！ |
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