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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 空载体酶切后条带大小不对
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听翠晨

铜虫 (初入文坛)

[求助] 空载体酶切后条带大小不对

我要构重组质粒，但是在第一步空载酶切上就出问题了，我是双酶切，跑胶时条带是一大一小，但是小的那条总略大于理论大小，换了几种酶还是这种效果，如图中间是两条是酶切质粒，两端是MARKER，理论上应该是3800bp,可是却快到5000bp了。我这载体还是原来的载体吗？求高手指点
空载体酶切后条带大小不对
酶切.jpg
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1楼2013-05-23 15:46:45
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
听翠晨(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-23 22:19:27
感觉质粒没有切开, 一个酶都没有切到. 楼主先测一下序列吧, 别用成了其他的质粒.
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2楼2013-05-23 19:25:55
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听翠晨

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-05-23 19:25:55
感觉质粒没有切开, 一个酶都没有切到. 楼主先测一下序列吧, 别用成了其他的质粒.

没有切开，怎么会有两条带呢，不懂
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3楼2013-07-20 09:26:11
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
听翠晨(gyesang代发): 金币+2, 鼓励应助！ 2013-07-20 21:46:41
提出来的质粒可能会后supercoil的状态(有点像缩成一团的橡皮筋), 这种状态的质粒和一般舒展的环形质粒跑胶速度不一样.
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4楼2013-07-20 18:22:25
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alicelchf

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
听翠晨(gyesang代发): 金币+2, 鼓励交流！ 2013-07-20 21:47:03
首先，你有么有跑对照——未酶切的质粒
再次，你可以把那个片段回收一下，再跑或者pcr判断是不是你所需要的片段——当然前提是你又pcr引物
有时候marker并不完全可靠，尤其是经过多次室温洗礼的，呵呵，但是多半还是相当可靠的
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修身、齐家、治国、平天下
5楼2013-07-20 18:39:25
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alicelchf

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 尤其是从别人那里拿过来的质粒，第一件事，就是测序！ 2013-07-20 21:47:29
补充一点就是你确实需要测序，我这半年就是跌到在了拿到的质粒都没有测序，哎，太相信人了
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修身、齐家、治国、平天下
6楼2013-07-20 18:40:30
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