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spritfood

新虫 (初入文坛)

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[求助] 求助单酶切插入基因片段问题

我现在要改造一个载体pHT43（8050bp），在KpnI单酶切位点插入一段820bp的序列，遇到了一些问题。过程就是把载体和基因片段都KpnI单酶切之后，载体做了去磷酸，T4连接之后转化DH5α大肠感受态，然后结果发现插入片段的引物做菌液鉴定是阳性，但是酶切之后发现一个正确的目的条带和一个比原pHT43质粒小了很多的载体片段，不知道什么原因。
后面有尝试过载体不做去磷酸，都是一样的结果，就是连接之后载体片段变小了，有高人支招么

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1楼 2013-05-09 16:30:58

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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-05-10 08:33:54

你确定载体只有一个kpnI位点吗？酶切后是否跑胶检查酶切条带？

2楼2013-05-10 01:25:49

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