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spritfood

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助单酶切插入基因片段问题

我现在要改造一个载体pHT43(8050bp),在KpnI单酶切位点插入一段820bp的序列,遇到了一些问题。过程就是把载体和基因片段都KpnI单酶切之后,载体做了去磷酸,T4连接之后转化DH5α大肠感受态,然后结果发现插入片段的引物做菌液鉴定是阳性,但是酶切之后发现一个正确的目的条带和一个比原pHT43质粒小了很多的载体片段,不知道什么原因。
后面有尝试过载体不做去磷酸,都是一样的结果,就是连接之后载体片段变小了,有高人支招么
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-05-10 08:33:54
你确定载体只有一个kpnI位点吗?酶切后是否跑胶检查酶切条带?
2楼2013-05-10 01:25:49
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