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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒双酶切BSA怎么加？
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小虫子MM

铜虫 (初入文坛)

[求助] 质粒双酶切BSA怎么加？

各位同学，我做的是双酶切，用NcoⅠ和XhoⅠ俩个酶，用的BUFFER写的是1×K+BSA，请问一下这个酶切体体系是什么啊？BSA加多少量啊？比如我总体系想切5μL！请同学们帮忙知道下！以前没加BSA的酶切体系如下：质粒3uL，水：1uL，buffer：0.5uL，酶各0.25uL！
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1楼 2013-04-07 12:58:45
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wanglei512

金虫 (正式写手)
NcoⅠ         0.5   UL      
XhoⅠ         0.5   UL
buffer K        2    UL
BSA             2    UL
DNA            <1ug
水              补至20ul
这是TAKARA的酶切
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8楼2013-04-08 08:44:48
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shangrila911

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 鼓励应助，分子生物版块，期待你的精彩。 2013-04-07 13:47:03
小虫子MM: 金币+1, ★有帮助 2013-04-11 17:36:25
K+BSA  是一种反应缓冲液 是成品  不是自己可以分开加的
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一切都会好的!
2楼2013-04-07 13:40:30
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小虫子MM

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shangrila911 at 2013-04-07 13:40:30
K+BSA  是一种反应缓冲液 是成品  不是自己可以分开加的

我们买的酶，比如XhoⅠ，袋里就带有0.1%的BSA啊
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3楼2013-04-07 14:52:25
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auroraA

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小虫子MM: 金币+2, ★有帮助 2013-04-11 17:34:41
如果你是做克隆的话,建议你根本就不要加BSA,因为BSA虽然可降低star activity,但是也影响activity. 一般1-2ug的plasmid, 1ul (10u/ul)enzyme, 1hr-1.5hr足够了
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4楼2013-04-07 15:00:03
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