应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 测序结果很奇怪
51/1返回列表
查看: 1833  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

longyh6411

金虫 (小有名气)

[求助] 测序结果很奇怪

我用A和B是同一物种，该物种的基因组数据早就出来了，而且是用A测得的。A和B在我研究的性状上有很大不同。我P了A和B的与这个形状相关的一个相关基因，片段不大，只有590bp，但是奇怪的事出来了，在3‘的(下游引物结合区域内,而且在做PCR的时候A和B用的是统一管引物)端A和B序列有l两个碱基比对不上，而且A和数据库也比对不上，有一个碱基的缺失另外一个碱基的突变。更关键的就是A的序列这个与B比对不上的碱基形成了终止密码子。也就是说和数据库相比终止密码子出现的提前了，也就导致了最后好几个氨基酸的缺失。
请问这是否是由于下游引物有问题呢还是可能是本身的突变?590单向测序可靠不？以前测了很多序列都没出现这样的问题，求高手帮忙
我只做了正向测序，测序是用的PCR产物

[ Last edited by longyh6411 on 2013-2-1 at 18:33 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-02-01 18:22:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

137167741

至尊木虫 (著名写手)
第一、可以双向测通验证一下；
第二、重新PCR一下，测序送两到三个平行样品备测或者同时测，以防出现类似的不好解释的情况或者现象；
第三、如果想弄清楚，可以重新设计新的引物，扩增片段大一些，把这590bp包括在内，在引物结合区是很容易出现问题的，一般来说引物是强制配对的。
实验顺利！！
赞一下 回复此楼
总有一天我要修改用户名。
9楼2013-02-04 11:51:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

chiden

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-02-01 21:13:08
在此想请问一个问题，楼主在扩增这个相关基因时设计的引物是刚好从起始密码子或终止密码子设计的？
在我们实验室，一般认为测序结果中前面80-100bp的测序结果是不准确的。不知道楼主那里的测序是不是从第一个碱基到最后一个碱基都保证是准确的？
遇到这样的问题，应该先去查一查测序结果中的ABI文件中碱基读取峰图。
看楼主上面说的似乎没有查证过。
如果峰型很好，说明测序公司给你的测序结果是准确的。
那么考虑是否真的发生了突变？
一般来说590bp一个反应足够了
还有要考虑的是PCR扩增的过程中是有一定的几率错配的
希望能帮到楼主吧，知道的也就这么多啦。。。
赞一下 回复此楼
即使难过，也要微笑着走下去
2楼2013-02-01 20:15:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longyh6411

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chiden at 2013-02-01 20:15:50
在此想请问一个问题，楼主在扩增这个相关基因时设计的引物是刚好从起始密码子或终止密码子设计的？
在我们实验室，一般认为测序结果中前面80-100bp的测序结果是不准确的。不知道楼主那里的测序是不是从第一个碱基到 ...

首先谢谢您的回复。这是测序的峰图，出现问题的地方不是特别好，您帮我看看吧。还有就是是按照起始密码子和终止密码子设计的，问题出现在3'端，测序是正向测序的，所以不在测序开始的100bp以内。还有就是这是PCR产物测序，PCR造成的突变影响比较微弱

捕获.PNG
赞一下 回复此楼
3楼2013-02-01 21:51:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

runying36

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
LZ说A和B的不同是在下游引物结合区内，那有可能是两条引物在合成的时候就有一条是错的呗。如果这段序列很重要，应该在这段之后设计引物来确定这段的真实序列。
赞一下 回复此楼
4楼2013-02-01 22:03:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0860004 求调剂 309分 +5 Yin DY 2026-04-08 5/250 2026-04-09 08:16 by may_新宇
[考研] 085801 总分275 本科新能源 求调剂 +5 bradoner 2026-04-08 6/300 2026-04-09 08:04 by Sammy2
[考研] 302分求调剂 +4 凡语祈愿 2026-04-08 5/250 2026-04-08 22:03 by 土木硕士招生
[考研] 求调剂 +6 chenxrlkx 2026-04-05 8/400 2026-04-08 16:03 by screening
[考研] 求材料调剂，一志愿郑州大学289分 +21 硕星赴 2026-04-03 21/1050 2026-04-08 11:55 by 猪会飞
[考研] 计算机11408 287 求调剂 +3 LiLe5 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:15 by shanqishi
[考研] 生物学学硕求调剂：351分一志愿南京师范大学生物学专业 +6 …～、王…～ 2026-04-06 7/350 2026-04-06 18:54 by macy2011
[考研] 一志愿国科大信工所,英二数二408总分293分求调剂 +3 ilcyuan 2026-04-02 4/200 2026-04-06 16:35 by likeihood
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +5 崔wj 2026-04-05 5/250 2026-04-06 15:40 by lin-da
[考研] 调剂 一志愿吉林大学357分 +5 .Starry. 2026-04-04 5/250 2026-04-06 09:28 by cql1109
[考研] 288求调剂 一志愿哈工大 材料与化工 +13 洛神哥哥 2026-04-03 13/650 2026-04-05 17:27 by zzx2138
[考研] 271分求调剂学校 +12 zph158488！ 2026-04-02 13/650 2026-04-05 10:13 by lqwchd
[考研] 301求调剂 +18 骆驼男人 2026-04-02 18/900 2026-04-04 20:33 by 蓝云思雨
[考研] 324求调剂 +14 想上学求调 2026-04-02 15/750 2026-04-04 20:31 by 无际的草原
[考研] 319求调剂 +4 星星不眨眼喽 2026-04-03 4/200 2026-04-04 16:25 by 中飞院空管学院�
[考研] 334求调剂 +8 曾仰之 2026-04-03 8/400 2026-04-04 11:16 by w_xuqing
[考研] 400分求调剂 +3 尴尬且挠头 2026-04-04 3/150 2026-04-04 08:41 by jp9609
[考研] 0705理学294求调剂 +3 成果成果cg5 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:04 by simons1972
[考研] 320求调剂 +3 农业工程与信息� 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:40 by 土木硕士招生
[考研] 260求调剂 +6 朱芷琳 2026-04-02 6/300 2026-04-02 20:27 by 6781022
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭