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让师弟做一个构建，引物是我设计的，并且这个反向引物以前用来做过两个构建，测序完全正确的（这点非常重要）！！！
目前的问题是，师弟拿这个反向引物做构建，测序发现老是在反向引物那一段，每次测序相同的位点反生了两个突变！！！
回复此楼
+1/88
这个问题是不是无解了？ 
引物不纯的话 同样的反向引物前两次构建的东西都没错 运气也太好了点。。。。 
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