24小时热门版块排行榜    

查看: 3854  |  回复: 22
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

btx362237729

金虫 (正式写手)


[交流] 构建载体测序,老在引物区段发生相同的错误,模版有突变?

让师弟做一个构建,引物是我设计的,并且这个反向引物以前用来做过两个构建,测序完全正确的(这点非常重要)!!!
PS:这个引物被我拿来通用做了几个构建,因为选择的质粒载体和酶切位点都没变,只是正向引物修改了。

目前的问题是,师弟拿这个反向引物做构建,测序发现老是在反向引物那一段,每次测序相同的位点反生了两个突变!!!

引物区段上怎么可能突变啊!!!不可能是引物错了,因为之前用这个反向引物测序都是正确的!!!

然后师弟再做了一次,三个单菌落,测序结果一样,还是反向引物那里错了!

我都凌乱了!!!我只能说是模版突变了!(模版是实验室传了一年半多的菌,提的质粒)!!难道真的突变了两个位点?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-02 13:58:30
引用回帖:
9楼: Originally posted by btx362237729 at 2012-11-02 12:05:24
但是引物不是新合成的。。。以前也是用的这个反向引物,现在用的是以前剩下的...

定引物的时候如果不要求过柱纯化的话公司只是做脱盐处理。有可能是合成的引物不是全长甚至错误的可能。因为HPLC或者RPC纯化的引物比较贵,做一般PCR大家都不选这个服务。可能你的引物不纯,有错误。据我的经验,从公司定的引物是有可能有错误碱基的。
10楼2012-11-02 12:43:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)



btx362237729(金币+1): 谢谢参与
即使模板突变了,P出来的东西应该是和引物序列一致的。因为模板的浓度很低,合成出来的DNA大量扩增都应该是引物序列。我怀疑你的引物错了,需要把引物测序鉴定一下。
3楼2012-11-02 07:12:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

竹子小小

木虫 (小有名气)



btx362237729(金币+1): 谢谢参与
看看测序图的峰是不是重叠的。可能是测序问题。
4楼2012-11-02 08:39:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yasmineross

铁虫 (小有名气)


★ ★ ★
btx362237729(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-02 13:58:18
如果测序结果没有问题的话,就是引物的质量问题了。

LZ一直说引物以前用过,是以前用过这个引物序列,还是一直用的同一支引物?

如果是根据老序列新合成的引物,那就是引物序列上有突变吧。
5楼2012-11-02 09:13:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 11:51 by xiangy672
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +6 雨打竹帘 2026-08-30 10/500 2026-08-31 09:29 by huixian257
[文学芳草园] 梦想 +4 myrtle 2026-08-26 4/200 2026-08-31 08:43 by 逸域隐帆
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +6 349506619 2026-08-28 6/300 2026-08-31 08:43 by kingkocxr
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 能否申诉? +6 echo8914667 2026-08-30 7/350 2026-08-31 08:41 by kingkocxr
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
请填处理意见