应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 构建载体测序，老在引物区段发生相同的错误，模版有突变？
51/1返回列表
查看: 2970  |  回复: 22
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

btx362237729

金虫 (正式写手)

[交流] 构建载体测序，老在引物区段发生相同的错误，模版有突变？

让师弟做一个构建，引物是我设计的，并且这个反向引物以前用来做过两个构建，测序完全正确的（这点非常重要）！！！
PS：这个引物被我拿来通用做了几个构建，因为选择的质粒载体和酶切位点都没变，只是正向引物修改了。

目前的问题是，师弟拿这个反向引物做构建，测序发现老是在反向引物那一段，每次测序相同的位点反生了两个突变！！！

引物区段上怎么可能突变啊！！！不可能是引物错了，因为之前用这个反向引物测序都是正确的！！！

然后师弟再做了一次，三个单菌落，测序结果一样，还是反向引物那里错了！

我都凌乱了！！！我只能说是模版突变了！（模版是实验室传了一年半多的菌，提的质粒）！！难道真的突变了两个位点？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼2012-11-02 00:23:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

btx362237729

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by virus2009 at 2012-11-02 10:26:05
你的反向是重新合成的还是你之前留下的？如果是重新合成的那可以考虑一下是不是合成错了引物，这个你可以让合成公司再帮你合成一对，确保引物无误后再分析。

反向引物不是重新合成的，以前我自己合成的，分装了很多冻在-20。。。。所以觉得很奇怪
赞一下 回复此楼
7楼2012-11-02 12:02:39
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
btx362237729(金币+1): 谢谢参与
即使模板突变了，P出来的东西应该是和引物序列一致的。因为模板的浓度很低，合成出来的DNA大量扩增都应该是引物序列。我怀疑你的引物错了，需要把引物测序鉴定一下。
赞一下 回复此楼
3楼2012-11-02 07:12:35
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

竹子小小

木虫 (小有名气)
★
btx362237729(金币+1): 谢谢参与
看看测序图的峰是不是重叠的。可能是测序问题。
赞一下 回复此楼
4楼2012-11-02 08:39:16
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yasmineross

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★
btx362237729(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-02 13:58:18
如果测序结果没有问题的话，就是引物的质量问题了。

LZ一直说引物以前用过，是以前用过这个引物序列，还是一直用的同一支引物？

如果是根据老序列新合成的引物，那就是引物序列上有突变吧。
赞一下 回复此楼
5楼2012-11-02 09:13:39
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭