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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 测序公司是不是搞错啦？？？
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)

[交流] 测序公司是不是搞错啦？？？ 已有5人参与

我的目的片段不长，300bp不到，我只测一个反应，写测序单的时候忘了说明应该是从3’端往5‘端测，他们给我从5端往3’端测的，结果也发给我了。第二天我告诉他们我的样品需要从3’端往5‘端测，希望他们早点把结果发给我，有点急，所以催了好几次。第三天早上结果发过来，说是从3’端往5‘端测出现了双峰，真是诡异，我觉得很奇怪，是不是他们自己把东西搞污染了。要不然为什么从5端往3’端测的结果没有出现双峰，从3’端往5‘端测却出现了双峰呢？大家说说看，是不是啊？
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1楼 2012-06-21 11:30:10
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冰泉cathy

木虫 (小有名气)
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amisking: 金币+3, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-06-21 19:42:30
不一定是污染了，也有可能是3‘--5’的测序引物在构建好的载体中有两个互补的位点，这样也有可能出现双峰啊~
而5‘-3’的测序引物只有一个互补位点，那就是一个峰了。
完全有可能出现这种情况的，不一定是污染了，楼主可以在测一次，看看结果会怎样吧~~
祝好运！
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肖颖2009
2楼2012-06-21 14:44:11
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小白虾

木虫 (正式写手)
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楼上说的很对 双峰不一定是样品污染 ，可能是引物的问题
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飞的更高
3楼2012-06-22 21:22:49
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冰泉cathy at 2012-06-21 14:44:11
不一定是污染了，也有可能是3‘--5’的测序引物在构建好的载体中有两个互补的位点，这样也有可能出现双峰啊~
而5‘-3’的测序引物只有一个互补位点，那就是一个峰了。
完全有可能出现这种情况的，不一定是污染了， ...

你对测序过程很了解啊，你原来是测序公司的吗？我的克隆子扩出来的带不清晰，是糊糊的一团，但大小是对的。
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4楼2012-06-28 18:22:43
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冰泉cathy

木虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2012-06-28 18:22:43
你对测序过程很了解啊，你原来是测序公司的吗？我的克隆子扩出来的带不清晰，是糊糊的一团，但大小是对的。...

不是的，你想太多了。那你试试呗，说不定就能行了。
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5楼2012-06-28 20:52:10
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十二1130

银虫 (小有名气)
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引用回帖:
2楼: Originally posted by 冰泉cathy at 2012-06-21 14:44:11
不一定是污染了，也有可能是3‘--5’的测序引物在构建好的载体中有两个互补的位点，这样也有可能出现双峰啊~
而5‘-3’的测序引物只有一个互补位点，那就是一个峰了。
完全有可能出现这种情况的，不一定是污染了， ...

对的，出现双峰是因为载体中也有相同的因为结合位点，可以换个引物重新测一次
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6楼2012-06-30 07:20:26
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syn1985

木虫 (正式写手)
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300bp大小的片段一个反应就足够了 根本不用再从另一端测序的 如果之前那个非双峰的结果测通了就不用再测了
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7楼2012-06-30 15:24:50
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longage.gene

银虫 (小有名气)
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DNA是双链，你的引物只有一条，不存在什么反过来测一说，序列结果你仔细看看。测序公司的人也挺有意思的。。。
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8楼2012-07-01 12:03:40
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