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肖颖2009

铁虫 (正式写手)

[交流] 测序公司是不是搞错啦??? 已有5人参与

我的目的片段不长,300bp不到,我只测一个反应,写测序单的时候忘了说明应该是从3’端往5‘端测,他们给我从5端往3’端测的,结果也发给我了。第二天我告诉他们我的样品需要从3’端往5‘端测,希望他们早点把结果发给我,有点急,所以催了好几次。第三天早上结果发过来,说是从3’端往5‘端测出现了双峰,真是诡异,我觉得很奇怪,是不是他们自己把东西搞污染了。要不然为什么从5端往3’端测的结果没有出现双峰,从3’端往5‘端测却出现了双峰呢?大家说说看,是不是啊?
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冰泉cathy

木虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
amisking: 金币+3, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-06-21 19:42:30
不一定是污染了,也有可能是3‘--5’的测序引物在构建好的载体中有两个互补的位点,这样也有可能出现双峰啊~
而5‘-3’的测序引物只有一个互补位点,那就是一个峰了。
完全有可能出现这种情况的,不一定是污染了,楼主可以在测一次,看看结果会怎样吧~~
祝好运!

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2012-06-21 14:44:11
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小白虾

木虫 (正式写手)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼上说的很对 双峰不一定是样品污染 ,可能是引物的问题
飞的更高
3楼2012-06-22 21:22:49
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冰泉cathy at 2012-06-21 14:44:11
不一定是污染了,也有可能是3‘--5’的测序引物在构建好的载体中有两个互补的位点,这样也有可能出现双峰啊~
而5‘-3’的测序引物只有一个互补位点,那就是一个峰了。
完全有可能出现这种情况的,不一定是污染了, ...

你对测序过程很了解啊,你原来是测序公司的吗?我的克隆子扩出来的带不清晰,是糊糊的一团,但大小是对的。
4楼2012-06-28 18:22:43
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冰泉cathy

木虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2012-06-28 18:22:43
你对测序过程很了解啊,你原来是测序公司的吗?我的克隆子扩出来的带不清晰,是糊糊的一团,但大小是对的。...

不是的,你想太多了。那你试试呗,说不定就能行了。
5楼2012-06-28 20:52:10
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十二1130

银虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冰泉cathy at 2012-06-21 14:44:11
不一定是污染了,也有可能是3‘--5’的测序引物在构建好的载体中有两个互补的位点,这样也有可能出现双峰啊~
而5‘-3’的测序引物只有一个互补位点,那就是一个峰了。
完全有可能出现这种情况的,不一定是污染了, ...

对的,出现双峰是因为载体中也有相同的因为结合位点,可以换个引物重新测一次
6楼2012-06-30 07:20:26
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syn1985

木虫 (正式写手)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
300bp大小的片段一个反应就足够了 根本不用再从另一端测序的 如果之前那个非双峰的结果测通了就不用再测了
7楼2012-06-30 15:24:50
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longage.gene

银虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
DNA是双链,你的引物只有一条,不存在什么反过来测一说,序列结果你仔细看看。测序公司的人也挺有意思的。。。
8楼2012-07-01 12:03:40
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