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张玉2008

金虫 (小有名气)

胖胖鱼

[求助] 求高手帮我看看我单酶切后的电泳图

我现在最大的困惑是最前面一根条带为什么这么不清晰,
根据原理,杂合子应该是三条带,大小分别是(226bp,173bp和53bp),可是样本的53bp的条带很不清晰,例如编号42、54、55等的条带,看起来像是切成了三段,但是53bp处的条带又很不清晰。

我用的是2%的胶,120V,40分钟。

请高手帮我分析一下原因。

29-60.jpg
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yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
张玉2008: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢,今天试试看 2013-01-18 08:20:53
胶做的不好,而且跑胶时间有点长,小片段有点弥散。
可适当增加酶切模板的量,理论上大片段和小片段的摩尔数是一样的,你的大片段都不是很亮,小片段就更弱了
3楼2013-01-17 22:36:52
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小猫三两只

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
张玉2008: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢,今天再重新做一次 2013-01-18 08:20:41
首先胶制得不太好,带看着很模糊。
酶切的量应该有些少,较大的片段也不是很亮,那么短片段亮度就更不够,建议酶切时多加些。
2楼2013-01-17 21:51:55
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