应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 已知基因序列，要用PCR克隆该基因，模板从哪里来？
51/1返回列表
查看: 2368  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

矛盾聚合体

铜虫 (初入文坛)

[求助] 已知基因序列，要用PCR克隆该基因，模板从哪里来？

　假设我已经得到基因序列了，我也知道下一步要PCR，设计引物什么的，但是我就是不知道模板从哪里来（我手上没有现成的）。。。是直接捣碎一个人的细胞提取全DNA吗？这样的话，模板未免也太多太杂了吧，得浪费多少核苷酸啊。。。
　我的想法是，把DNA提取出来以后用限制酶切了，然后电泳，比如目的基因是500bp的，那我就选500bp的区段电泳出来的DNA片段作PCR。。。可是，即便是这样，也还是含有很多很多的片段啊，而且限制酶切出来的位点正好在我要的基因上怎末办？小弟只是处在理论阶段的大一生，从来没有动手操作过，提取的想法未免幼稚，请各位见谅
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-01-06 10:45:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

justdilo

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-06 19:46:09
酶切不是更浪费，切下来的核苷酸不是一样被扔掉了，何况还要用内切酶。
DNA做模板嘛，要考虑有没有内含子，可以先试一试，建议用RNA。
不过别灰心，作为大一生，你已经很强大很强大了。
赞一下 回复此楼
我，一无所有！
3楼2013-01-06 10:59:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

矛盾聚合体

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by weiwei_l at 2013-01-06 10:58:40
加油楼主

谢谢~~
回复此楼
4楼2013-01-06 11:02:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

矛盾聚合体

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by justdilo at 2013-01-06 10:59:05
酶切不是更浪费，切下来的核苷酸不是一样被扔掉了，何况还要用内切酶。
DNA做模板嘛，要考虑有没有内含子，可以先试一试，建议用RNA。
不过别灰心，作为大一生，你已经很强大很强大了。

谢谢。。。其实我想知道大家都是怎么做的
赞一下 回复此楼
5楼2013-01-06 11:03:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tigertang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
矛盾聚合体: 金币+15, ★★★★★最佳答案, 谢谢了。。。意思就是说，这种技术其实还不是很成熟很普遍对吗？ 2013-01-06 11:27:01
1. 最省事的办法：查文献，向其他研究者要带该基因的质粒，直接用作模板或你自己的研究
2.从公司买带cDNA的载体
3.自己提取RNA，反转录成cDNA,以cDNA为模板，扩增你想要的基因（一定要事先确认拟用于提取RNA的组织或细胞里，该基因表达比较高）
赞一下 回复此楼
6楼2013-01-06 11:15:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 296求调剂 +3 www_q 2026-03-18 6/300 2026-03-19 22:28 by zhq0425
[考研] 288求调剂，一志愿华南理工大学071005 +5 ioodiiij 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:22 by zcl123
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +9 一鸭鸭哟 2026-03-14 11/550 2026-03-19 17:22 by ！本暗一次！
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +8 zlingli 2026-03-13 8/400 2026-03-19 16:32 by 轻松不少随
[考研] 266求调剂 +5 阳阳哇塞 2026-03-14 10/500 2026-03-19 15:08 by 阳阳哇塞
[考研] 材料与化工求调剂 +7 为学666 2026-03-16 7/350 2026-03-19 14:48 by 尽舜尧1
[考研] 求调剂 +3 Mqqqqqq 2026-03-19 3/150 2026-03-19 14:11 by peike
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +4 材化逐梦人 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:22 by 007_lilei
[考研] 303求调剂 +4 睿08 2026-03-17 6/300 2026-03-18 11:01 by Iveryant
[考研] 环境工程调剂 +8 大可digkids 2026-03-16 8/400 2026-03-18 09:36 by zhukairuo
[考研] 293求调剂 +11 zjl的号 2026-03-16 16/800 2026-03-18 08:10 by zhukairuo
[考研] 268求调剂 +8 一定有学上- 2026-03-14 9/450 2026-03-17 17:47 by laoshidan
[考研] 考研化学学硕调剂，一志愿985 +4 张vvvv 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:15 by ruiyingmiao
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 080500，材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化，一志愿：哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭