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矛盾聚合体

铜虫 (初入文坛)

[求助] 已知基因序列，要用PCR克隆该基因，模板从哪里来？

　假设我已经得到基因序列了，我也知道下一步要PCR，设计引物什么的，但是我就是不知道模板从哪里来（我手上没有现成的）。。。是直接捣碎一个人的细胞提取全DNA吗？这样的话，模板未免也太多太杂了吧，得浪费多少核苷酸啊。。。
　我的想法是，把DNA提取出来以后用限制酶切了，然后电泳，比如目的基因是500bp的，那我就选500bp的区段电泳出来的DNA片段作PCR。。。可是，即便是这样，也还是含有很多很多的片段啊，而且限制酶切出来的位点正好在我要的基因上怎末办？小弟只是处在理论阶段的大一生，从来没有动手操作过，提取的想法未免幼稚，请各位见谅
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1楼2013-01-06 10:45:16
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tigertang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
矛盾聚合体: 金币+15, ★★★★★最佳答案, 谢谢了。。。意思就是说，这种技术其实还不是很成熟很普遍对吗？ 2013-01-06 11:27:01
1. 最省事的办法：查文献，向其他研究者要带该基因的质粒，直接用作模板或你自己的研究
2.从公司买带cDNA的载体
3.自己提取RNA，反转录成cDNA,以cDNA为模板，扩增你想要的基因（一定要事先确认拟用于提取RNA的组织或细胞里，该基因表达比较高）
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6楼2013-01-06 11:15:38
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tigertang

木虫 (著名写手)
"意思就是说，这种技术其实还不是很成熟很普遍对吗?"

这个说法不妥，已经是常规技术了。
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9楼2013-01-06 17:27:05
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