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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR验证稳转细胞株中转染进去的基因序列
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] PCR验证稳转细胞株中转染进去的基因序列

最近要验证一下稳转株内是否整合了正确的基因序列，
有人说得抽提RNA作RT-PCR。
有没有什么好的办法把细胞简单处理，使基因组DNA游离出来作为模板，用特异性引物直接PCR？有人这么成功过吗。
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1楼 2011-09-29 09:30:56
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gongeleven(金币+2): 2011-09-29 10:38:20
adslye(金币+2): 鼓励交流~ 2011-09-29 13:34:25
直接做southern不就好了么……
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显微镜下的世界很精彩！
2楼2011-09-29 09:46:42
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by asznpb at 2011-09-29 09:46:42:
直接做southern不就好了么……

southern可以知道精确的序列码
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3楼2011-09-29 10:36:10
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
adslye(金币+1): 感谢推荐~~ 2011-09-29 13:35:09
引用回帖:
2楼: Originally posted by asznpb at 2011-09-29 09:46:42:
直接做southern不就好了么……

southern单拷贝的样品拉侧翼（有takara的盒子）或者做反向PCR都可以
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显微镜下的世界很精彩！
4楼2011-09-29 10:42:54
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 很耐心~鼓励~ 2011-09-29 13:35:01
gongeleven(金币+1): 谢谢。以后试试，不过这次来不及订购新试剂了。。 2011-09-29 14:08:49
gongeleven(金币+2): 2012-02-22 10:31:22
因为你本身就是为了验证插入序列是否正确的插入，所以，做southern的探针就是用你的插入序列的一部分做的，杂交有结果说明插入序列整合到了基因组上，完了你在拉侧翼序列，拿到插入序列两端的序列，再返回拉一下就知道是否完全插入正确了……或者你直接做敲除互补也能验证
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显微镜下的世界很精彩！
5楼2011-09-29 10:45:53
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

western检测也可 以啊     就是麻烦
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6楼2011-09-29 14:01:51
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