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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 电泳图为什么有拖尾
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liuyun076826

金虫 (初入文坛)

[求助] 电泳图为什么有拖尾

对目的片段切胶回收进行连接转化，挑单克隆，摇菌后用M13通用引物进行菌液PCR，退火温度设为55度，目的条带为1kb左右。电泳后发现有目的条带的拖尾非常严重，这是什么原因造成的？我电泳时的电压为90v，胶浓度约为1.5%。菌液在4度存放了3-4天，会有影响吗？麻烦高手帮忙分析一下。

胶图.jpg
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1楼2012-12-25 19:22:06
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mguo15

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liuyun076826: 金币+1, ★有帮助 2012-12-26 14:42:21
菌不会有问题！你是否模板DNA用的太多了，建议减少菌液试试。另外PCR产物上样也酌情减少。
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3楼2012-12-25 20:32:24
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moshangchenx

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liuyun076826: 金币+1, ★有帮助 2012-12-26 14:43:14
个人感觉胶没制好，好的胶MARKER是不会有拖尾的，建议看一下marker说明书，是不是2%更合适
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科研无止境，我心成蹉跎
2楼2012-12-25 20:20:09
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liuyun076826: 金币+1, ★有帮助 2012-12-26 14:42:29
可能原因：
1、退火温度偏低，导致非特异扩增增多；
2、模板量太高；

1kb的片段，1.0或1.2的胶就可以啦。上1kb的，我都用0.8.
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生物资源交流QQ群：1044518333
4楼2012-12-25 20:56:56
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匿名

用户注销 (正式写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
liuyun076826: 金币+1, ★有帮助 2012-12-26 14:43:02
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5楼2012-12-25 21:22:49
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