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liuyun076826

金虫 (初入文坛)

[求助] 电泳图为什么有拖尾

对目的片段切胶回收进行连接转化，挑单克隆，摇菌后用M13通用引物进行菌液PCR，退火温度设为55度，目的条带为1kb左右。电泳后发现有目的条带的拖尾非常严重，这是什么原因造成的？我电泳时的电压为90v，胶浓度约为1.5%。菌液在4度存放了3-4天，会有影响吗？麻烦高手帮忙分析一下。

胶图.jpg
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1楼 2012-12-25 19:22:06
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liuyun076826: 金币+1, ★有帮助 2012-12-26 14:42:29
可能原因：
1、退火温度偏低，导致非特异扩增增多；
2、模板量太高；

1kb的片段，1.0或1.2的胶就可以啦。上1kb的，我都用0.8.
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生物资源交流QQ群：1044518333
4楼2012-12-25 20:56:56
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