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liuyun076826

金虫 (初入文坛)

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[求助] 电泳图为什么有拖尾

对目的片段切胶回收进行连接转化，挑单克隆，摇菌后用M13通用引物进行菌液PCR，退火温度设为55度，目的条带为1kb左右。电泳后发现有目的条带的拖尾非常严重，这是什么原因造成的？我电泳时的电压为90v，胶浓度约为1.5%。菌液在4度存放了3-4天，会有影响吗？麻烦高手帮忙分析一下。

胶图.jpg

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1楼 2012-12-25 19:22:06

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liuyun076826

金虫 (初入文坛)

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引用回帖:

8楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-26 01:21:49
直接用菌做PCR模板本身就脏，DNA的量也不容易控制，一般都是太多。PCR产物有拖尾的现象属于正常。反正做这类PCR的目的只是筛选阳性克隆，有目的条带就可以了，对图片的质量没那么严格吧。
至于marker也有些问题可能 ...

谢谢回复。我用的引物是M13F(-47), M13R(-48). 这对引物正反向Tm值差很多，一个是68度左右，一个是57度左右，所以我用的55度退火。
确实是图片质量要求不严格，但是这样的结果如果是PCR体系或者电泳的影响问题倒也不大，如果是菌液本身的问题的话，会不会影响测序呀？我计划把菌液送出去测序的~