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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 电泳图为什么有拖尾
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liuyun076826

金虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by mguo15 at 2012-12-25 20:32:24
菌不会有问题！你是否模板DNA用的太多了，建议减少菌液试试。另外PCR产物上样也酌情减少。

谢谢。菌没问题我就放心了，我20ul的体系加了1uL的菌液。PCR产物上了5ul，以后减少上样量
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11楼2012-12-26 08:41:56
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liuyun076826

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by snoopyzxx at 2012-12-25 20:56:56
可能原因：
1、退火温度偏低，导致非特异扩增增多；
2、模板量太高；

1kb的片段，1.0或1.2的胶就可以啦。上1kb的，我都用0.8.

谢谢！
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12楼2012-12-26 08:42:10
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liuyun076826

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 大-木-虫 at 2012-12-25 21:22:49
你看看你marker都拖带，可能是电泳液或者是胶版没有做好吧

可能是电泳液吧，用了10天了
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13楼2012-12-26 08:42:57
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liuyun076826

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 身未动 at 2012-12-25 21:29:13
（1）菌液浓度高，导致模板浓度高了，下次你稀释一下试试。
（2）退火温度低，把退火温度升个5度试试。

好的，谢谢您的建议
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14楼2012-12-26 08:43:20
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
样品浓度高了，稀释一下就会好多了
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15楼2012-12-26 11:53:32
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
liuyun076826: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-12-26 14:41:21
引用回帖:
9楼: Originally posted by liuyun076826 at 2012-12-26 08:38:24
谢谢回复。我用的引物是M13F(-47), M13R(-48). 这对引物正反向Tm值差很多，一个是68度左右，一个是57度左右，所以我用的55度退火。
确实是图片质量要求不严格，但是这样的结果如果是PCR体系或者电泳的影响问题倒也 ...

如果是挑的单克隆，经检测呈阳性的话可以直接送测序，不会影响结果的。
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16楼2012-12-26 13:00:02
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liuyun076826

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by yongbo_liang at 2012-12-26 11:53:32
样品浓度高了，稀释一下就会好多了

好的，谢谢
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17楼2012-12-26 14:41:01
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guanxizhu123

新虫 (初入文坛)
是不是电泳液时间长了，换电泳液试试
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专业预防兽医学，免疫与微生物方面，希望大家多多帮助
18楼2012-12-28 11:10:22
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514278815

木虫 (小有名气)
为何不提一下质粒呢？质粒图出来后会帮助你解决问题，怀疑菌液有问题可以用提的质粒PCR看是否有非特异性条带，通用引物PCR55度可以的；提取的质粒应该是2-3条带；另外你做的胶确实不大好，MARKER是不会有拖尾的。
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19楼2013-09-03 12:05:23
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没想好名字

新虫 (初入文坛)
你的market竟然也拖尾！似乎胶 的浓度过高，而电压又过低，会导致电泳的时间延长，一般电泳时间在20到30分钟比较好。同时你上样的量也有点高，不过鉴于你只要检测出有目的条带就行，所以倒也影响不大。
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20楼2015-05-08 14:43:27
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