3楼: Originally posted by mguo15 at 2012-12-25 20:32:24
菌不会有问题！你是否模板DNA用的太多了，建议减少菌液试试。另外PCR产物上样也酌情减少。

4楼: Originally posted by snoopyzxx at 2012-12-25 20:56:56
可能原因：
1、退火温度偏低，导致非特异扩增增多；
2、模板量太高；

1kb的片段，1.0或1.2的胶就可以啦。上1kb的，我都用0.8.

5楼: Originally posted by 大-木-虫 at 2012-12-25 21:22:49
你看看你marker都拖带，可能是电泳液或者是胶版没有做好吧

6楼: Originally posted by 身未动 at 2012-12-25 21:29:13
（1）菌液浓度高，导致模板浓度高了，下次你稀释一下试试。
（2）退火温度低，把退火温度升个5度试试。

9楼: Originally posted by liuyun076826 at 2012-12-26 08:38:24
谢谢回复。我用的引物是M13F(-47), M13R(-48). 这对引物正反向Tm值差很多，一个是68度左右，一个是57度左右，所以我用的55度退火。
确实是图片质量要求不严格，但是这样的结果如果是PCR体系或者电泳的影响问题倒也 ...

15楼: Originally posted by yongbo_liang at 2012-12-26 11:53:32
样品浓度高了，稀释一下就会好多了