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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 包涵体蛋白纯化不溶解，怎麽办？
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简单HE认真

木虫 (小有名气)

[求助] 包涵体蛋白纯化不溶解，怎麽办？ 已有2人参与

菌体定位后，目的蛋白在沉淀中，即包涵体表达，但是包含体没办法溶解，请教一下各位该怎麽办?顺便问一下，可否加一点表变活性剂或乙醇以增加疏水性蛋白的溶解...
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简单做人，认真做事。
1楼 2012-08-18 15:59:42
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xiongyaoling

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般用8M脲素或6M的盐酸胍可以溶解的。超声助溶
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3楼2012-08-18 18:36:31
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jackenmickey

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
15楼2012-08-23 13:12:44
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daguo0648

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

小MM，6MGuaHCl和8MUrea都可以溶解包涵体，而且都是可以过His柱的，你是从哪里听说他俩不能上His柱呢？而且GuaHCl增溶效果更好，过柱效果也好，因为本身是高盐可以防止非特异性吸附。你的包涵体最好先用1%triton，50mMTris，50mMnaCl，pH8.0去超声洗涤一下包涵体，然后离心沉淀再用50mMTris，6MGuaHCl，1mMDTT（5mMβ-ME）搅拌增溶3h即可，直接上His柱就行。DTT可以选择性添加，而且浓度不能高，否则不能过his柱会把Ni还原掉。如果搅拌增溶不行可以试试超声，基本不会有哪种包涵体连超声都无法增溶的，祝你好运。
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小小爬虫
17楼2012-08-23 16:49:17
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普通回帖

会思想的芦苇

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 可以 2012-08-23 16:58:21
8M 尿素溶解不了？用超声波辅助一下试试
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2楼2012-08-18 16:56:27
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xuyihui2001

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加些DTT或巯基乙醇1-3%
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4楼2012-08-19 09:16:09
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简单HE认真

木虫 (小有名气)
内容已删除
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简单做人，认真做事。
5楼2012-08-19 14:02:33
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简单HE认真

木虫 (小有名气)
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简单做人，认真做事。
6楼2012-08-19 14:10:46
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指上阡陌

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用8M尿素沉淀，然后稀释到1M，然后离心取上清即可
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虚心学习
7楼2012-08-20 11:06:26
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-08-20 14:00:10
你先用2M尿素溶解，洗下沉淀去杂，然后离心取沉淀，用8M尿素溶解，在摇床上室温孵育至少1个小时。之后离心取上清去过柱子。8M尿素是可以过镍柱的，不过有点伤。

如果你的蛋白沉淀一直都无法溶解的话，我介意你从养菌着手。
在加IPTG诱导之前，先把摇床的温度降到15度，然后再加IPTG诱导，15度过夜。
这样或许你的蛋白结构会好些，就不会全部都是不溶的。
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8楼2012-08-20 11:15:08
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jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以考虑加个标签试试。
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静心做事。
9楼2012-08-20 11:48:11
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简单HE认真

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by gelois at 2012-08-20 11:15:08
你先用2M尿素溶解，洗下沉淀去杂，然后离心取沉淀，用8M尿素溶解，在摇床上室温孵育至少1个小时。之后离心取上清去过柱子。8M尿素是可以过镍柱的，不过有点伤。

如果你的蛋白沉淀一直都无法溶解的话，我介意你从 ...

15度又到有点太低了吧，我们过夜通常是20-25度的....
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简单做人，认真做事。
10楼2012-08-20 14:45:46
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