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简单HE认真

木虫 (小有名气)

[求助] 包涵体蛋白纯化不溶解,怎麽办? 已有2人参与

菌体定位后,目的蛋白在沉淀中,即包涵体表达,但是包含体没办法溶解,请教一下各位该怎麽办?顺便问一下,可否加一点表变活性剂或乙醇以增加疏水性蛋白的溶解...
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-08-20 14:00:10
你先用2M尿素溶解,洗下沉淀去杂,然后离心取沉淀,用8M尿素溶解,在摇床上室温孵育至少1个小时。之后离心取上清去过柱子。8M尿素是可以过镍柱的,不过有点伤。

如果你的蛋白沉淀一直都无法溶解的话,我介意你从养菌着手。
在加IPTG诱导之前,先把摇床的温度降到15度,然后再加IPTG诱导,15度过夜。
这样或许你的蛋白结构会好些,就不会全部都是不溶的。
8楼2012-08-20 11:15:08
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查看全部 21 个回答

会思想的芦苇

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 可以 2012-08-23 16:58:21
8M 尿素溶解不了?用超声波辅助一下试试
2楼2012-08-18 16:56:27
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xiongyaoling

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般用8M脲素或6M的盐酸胍可以溶解的。超声助溶
3楼2012-08-18 18:36:31
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xuyihui2001

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
加些DTT或巯基乙醇1-3%
4楼2012-08-19 09:16:09
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