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简单HE认真

木虫 (小有名气)

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[求助] 包涵体蛋白纯化不溶解，怎麽办？已有2人参与

菌体定位后，目的蛋白在沉淀中，即包涵体表达，但是包含体没办法溶解，请教一下各位该怎麽办?顺便问一下，可否加一点表变活性剂或乙醇以增加疏水性蛋白的溶解...

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简单做人，认真做事。

1楼2012-08-18 15:59:42

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gelois

金虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-08-20 14:00:10

你先用2M尿素溶解，洗下沉淀去杂，然后离心取沉淀，用8M尿素溶解，在摇床上室温孵育至少1个小时。之后离心取上清去过柱子。8M尿素是可以过镍柱的，不过有点伤。

如果你的蛋白沉淀一直都无法溶解的话，我介意你从养菌着手。
在加IPTG诱导之前，先把摇床的温度降到15度，然后再加IPTG诱导，15度过夜。
这样或许你的蛋白结构会好些，就不会全部都是不溶的。