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匿名

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1楼 2012-05-21 21:03:52
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回帖置顶 ( 共有1个 )

皖山潜凤

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 应助指数+1, 鼓励交流~高人啊！ 2012-05-25 10:32:45
facingworld: 金币+12, ★★★★★最佳答案, 太有帮助了，真的是高人呀 2012-05-28 09:48:07
溶解包涵体没必要低温，温度越高越好，要是担心高温尿素分解的修饰影响，就加点tris进去，可以中和掉分解的尿素，包涵体溶解对ph 没多大要求

盐酸胍和尿素也没有根本的区别，但是是否加入还原剂有区别，

另外有极个别蛋白必须用sds溶解，sds基本可以搞定一切，溶解完全后用阴离子交换在尿素平衡条件下去掉sds，在柱子上调换变性剂，然后进行后续各种处理

当然首先你要跟踪包涵体是否还在，溶解之前电泳，溶解后上清和沉淀都要电泳，不建议用盐酸胍，因为这玩意处理了电泳麻烦，尤其是和尿素没有本质区别。

不过文献你也得看，自己脑子也的动动，生物这玩意玩的就是重复，玩的就是试探，玩的就是对照，设计好思路，不断试探，
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28楼2012-05-25 07:01:23
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匿名

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2楼2012-05-21 22:11:51
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 辛苦！ 2012-05-22 08:26:40
facingworld: 金币+5 2012-05-23 14:41:53
Purification of inclusion bodies and refolding of proteins

http://ishare.iask.sina.com.cn/f/18503995.html
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3楼2012-05-21 22:16:42
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匿名

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4楼2012-05-21 22:34:08
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
你怎么知道此流程不对那！！！？？？你那么有能耐！你自己做吧！！我还不管了！！！
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5楼2012-05-21 23:37:28
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niugang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
facingworld: 金币+5, ★有帮助, 我用的是8M的尿素 2012-05-23 14:42:39
用尿素去溶解，你可以看下很多人的毕业论文，我看就是这样的，8mol 的尿素
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6楼2012-05-22 08:41:19
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 谢谢分享哦~ 2012-05-22 16:41:47
facingworld: 金币+8, ★★★很有帮助, 谢谢哈！幸苦啦！ 2012-05-23 14:43:31
我这有个文件，还有篇文献，自己研究下，结合自己情况去改善。祝你成功！
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    • 2012-05-22 16:19:01, 272.75 K
  • 附件 2 : 蛋白包涵体溶解原理和方法.doc
    • 2012-05-22 16:19:04, 28 K
7楼2012-05-22 16:19:09
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红虫梦

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流~ 2012-05-24 21:53:50
我正在做这方面的，我的蛋白时30多K的。你先得将包涵体进行初纯化，再用8mol的urea进行溶解，肯定有沉淀溶解不了，目的蛋白时可以溶解的。
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梦想
8楼2012-05-22 17:07:41
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匿名

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9楼2012-05-22 17:28:49
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

我没有具体操作？！那么北京大学的博士学位你说给的！！！！！！！！！？？？？？？？？？本来我今天还想给你多说几句！！！！！！！！！！！！你还挺狂！！！！！！！！！那你就狂吧！！！！！！！！！告诉你：变性后用层析也能复性！！！！！
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10楼2012-05-22 20:51:51
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