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匿名

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皖山潜凤

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 应助指数+1, 鼓励交流~高人啊! 2012-05-25 10:32:45
facingworld: 金币+12, ★★★★★最佳答案, 太有帮助了,真的是高人呀 2012-05-28 09:48:07
溶解包涵体没必要低温,温度越高越好,要是担心高温尿素分解的修饰影响,就加点tris进去,可以中和掉分解的尿素,包涵体溶解对ph 没多大要求

盐酸胍和尿素也没有根本的区别,但是是否加入还原剂有区别,

另外有极个别蛋白必须用sds溶解,sds基本可以搞定一切,溶解完全后用阴离子交换在尿素平衡条件下去掉sds,在柱子上调换变性剂,然后进行后续各种处理

当然首先你要跟踪包涵体是否还在,溶解之前电泳,溶解后上清和沉淀都要电泳,不建议用盐酸胍,因为这玩意处理了电泳麻烦,尤其是和尿素没有本质区别。

不过文献你也得看,自己脑子也的动动,生物这玩意玩的就是重复,玩的就是试探,玩的就是对照,设计好思路,不断试探,
28楼2012-05-25 07:01:23
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匿名

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2楼2012-05-21 22:11:51
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 辛苦! 2012-05-22 08:26:40
facingworld: 金币+5 2012-05-23 14:41:53
Purification of inclusion bodies and refolding of proteins

http://ishare.iask.sina.com.cn/f/18503995.html
3楼2012-05-21 22:16:42
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匿名

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4楼2012-05-21 22:34:08
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

你怎么知道此流程不对那!!!???你那么有能耐!你自己做吧!!我还不管了!!!
5楼2012-05-21 23:37:28
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niugang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
facingworld: 金币+5, 有帮助, 我用的是8M的尿素 2012-05-23 14:42:39
用尿素去溶解,你可以看下很多人的毕业论文,我看就是这样的,8mol 的尿素
6楼2012-05-22 08:41:19
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 谢谢分享哦~ 2012-05-22 16:41:47
facingworld: 金币+8, ★★★很有帮助, 谢谢哈!幸苦啦! 2012-05-23 14:43:31
我这有个文件,还有篇文献,自己研究下,结合自己情况去改善。祝你成功!

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  • 附件 1 : 包涵体重组蛋白的纯化及复性.pdf
  • 2012-05-22 16:19:01, 272.75 K
  • 附件 2 : 蛋白包涵体溶解原理和方法.doc
  • 2012-05-22 16:19:04, 28 K
7楼2012-05-22 16:19:09
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红虫梦

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流~ 2012-05-24 21:53:50
我正在做这方面的,我的蛋白时30多K的。你先得将包涵体进行初纯化,再用8mol的urea进行溶解,肯定有沉淀溶解不了,目的蛋白时可以溶解的。
梦想
8楼2012-05-22 17:07:41
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匿名

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9楼2012-05-22 17:28:49
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

我没有具体操作?!那么北京大学的博士学位你说给的!!!!!!!!!?????????本来我今天还想给你多说几句!!!!!!!!!!!!你还挺狂!!!!!!!!!那你就狂吧!!!!!!!!!告诉你:变性后用层析也能复性!!!!!
10楼2012-05-22 20:51:51
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