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dy_414

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-03 15:29:25
1.可能是二硫键错配形成了部分包涵体,lz加DTT或者巯基乙醇试试
2. 用6M盐酸胍溶解,GdmHCl的溶解效果要比尿素好
我坚信,rp是攒出来的
41楼2012-07-03 11:39:24
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_Chiao_

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

版主你好,不知你最後純化出的條件為何?
我的目標蛋白是在30多KDa,因為要上His Column,所以參照IMAC Review的Inclusion Body處理方法,也是用8M Urea在室溫(設定25度)去融半小時,之後離心後也是沒有融解,之後設定在1hr、1hr30min、2hr去融一樣都沒有融解
有爬文看到有人說加10mM DTT,可是因為要上His Trap Column,加了DTT去處理時純化會很麻煩,不知您最後是用何種方法去融解包涵體的
42楼2012-10-24 14:49:29
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linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

包涵体的溶解主要通过以下几个途径来实现:
1.变性剂,如盐酸胍要比尿素的效果好些,尿素也有用到9M,盐酸胍也有用到7M的;
2.pH,可使用高一点的pH,比如10,12等;
3.辅助试剂,如DTT等;
4.外力帮助,比如超声波等;
5.溶解方法,包涵体的溶解状态有时与操作者的习惯密切相关。
小兵一个
43楼2012-10-25 12:59:59
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