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dy_414

木虫 (正式写手)

应助: 20 (小学生)
金币: 2316.5
散金: 26
红花: 4
帖子: 390
在线: 29.8小时
虫号: 830319
注册: 2009-08-18
性别: GG
专业: 基因表达调控与表观遗传学

【答案】应助回帖

★
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-03 15:29:25

1.可能是二硫键错配形成了部分包涵体，lz加DTT或者巯基乙醇试试
2. 用6M盐酸胍溶解，GdmHCl的溶解效果要比尿素好

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我坚信，rp是攒出来的

41楼2012-07-03 11:39:24

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_Chiao_

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 12
帖子: 1
在线: 40分钟
虫号: 2082907
注册: 2012-10-24

【答案】应助回帖

版主你好，不知你最後純化出的條件為何?
我的目標蛋白是在30多KDa，因為要上His Column，所以參照IMAC Review的Inclusion Body處理方法，也是用8M Urea在室溫(設定25度)去融半小時，之後離心後也是沒有融解，之後設定在1hr、1hr30min、2hr去融一樣都沒有融解
有爬文看到有人說加10mM DTT，可是因為要上His Trap Column，加了DTT去處理時純化會很麻煩，不知您最後是用何種方法去融解包涵體的

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42楼2012-10-24 14:49:29

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linxt2005

金虫 (小有名气)

MolEPI: 1
应助: 40 (小学生)
金币: 1250.3
红花: 2
帖子: 185
在线: 141.1小时
虫号: 2062910
注册: 2012-10-15
性别: GG
专业: 蛋白质组学

【答案】应助回帖

包涵体的溶解主要通过以下几个途径来实现：
１.变性剂，如盐酸胍要比尿素的效果好些，尿素也有用到９Ｍ，盐酸胍也有用到７Ｍ的；
２.pH，可使用高一点的pH，比如10,12等；
３.辅助试剂，如ＤＴＴ等；
４.外力帮助，比如超声波等；
５.溶解方法，包涵体的溶解状态有时与操作者的习惯密切相关。

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小兵一个

43楼2012-10-25 12:59:59

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