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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重组蛋白是包涵体怎么溶
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

我知道如何具体操作，你既然你认为我根本没有做过，那就算了！！！不过，提示你：什么时候存在反应物抑制？如何增大表面积加快反应速度！就说到这里！你有本事自己做吧！我又不欠您的！！
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11楼2012-05-22 20:54:47
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
引用回帖:
9楼: Originally posted by facingworld at 2012-05-22 17:28:49:
你也没有具体操作过吧，我做了很多的，这次是特别，出不来，不过看你这么辛苦的恢复帖子，给你金币吧

我不需要你的金币！你以为单纯地改变试剂浓度，pH，分一分梯度就能凑出来？想想化学反应动力学的基本原理吧。改进有时很容易也很有效，但是如果只知道重复是没有用的！化学热力学只能保证反应能够进行，但是时间是1分钟还是1万年，那是化学反应动力学的任务！
本来我的确觉得我昨天说得太过分了，想给你一些新的Protocols（绝大多数可不是我发明的），不过既然阁下既然认为我连包涵体就没有纯化过，那您就摸索吧。。。
最后一句：假定此种包涵体根本无法在有限时间溶解怎么办？当然有别的办法，不要在表达时形成包涵体不就行了，具体则么做？我不说！因为，您认为我不配回答您的问题，那么我就不回答了。。。祝您好运！
抱歉！前两贴我设成了回帖应助。
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12楼2012-05-22 21:05:35
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
你不说我没有纯化溶解过包涵体吗！？就当我是胡说。。。

阁下的溶解包涵体的反应体系对吗！！？？别的不提，试剂种类、温度？？？。。。我都是胡说八道哪！！。。。
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13楼2012-05-22 21:19:28
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匿名

用户注销 (正式写手)
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14楼2012-05-23 14:45:07
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radium4046

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-24 21:56:56
facingworld: 金币+3, ★★★很有帮助, 我也是这样做的，就是不溶解，不过还是谢谢哈 2012-05-28 09:51:24
首先你要确定是在包涵体中，破碎后沉淀会泛白，并且量很多，SDS会有很大的目的条带，沉淀先用含有edta、triton、DTT的洗液洗两遍，再用2MUrea洗，这样包涵体会纯一些，8M Urea溶解会有杂质，离心去除就行，如果确定8M Urea都不溶解，那换盐酸胍试试
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15楼2012-05-23 15:48:25
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547star

木虫 (著名写手)
楼上面那位北大博士,让我想起那位发沈同笔记"上官婉儿"...
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为什么
16楼2012-05-23 16:21:45
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zk0604

木虫 (正式写手)
好可怕
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17楼2012-05-24 17:37:16
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ctt1984
引用回帖:
10楼: Originally posted by 凌波丽 at 2012-05-22 20:51:51:
我没有具体操作？！那么北京大学的博士学位你说给的！！！！！！！！！？？？？？？？？？本来我今天还想给你多说几句！！！！！！！！！！！！你还挺狂！！！！！！！！！那你就狂吧！！！！！！！！！告诉你：变性

18楼2012-05-24 21:46:22
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
引用回帖:
14楼: Originally posted by facingworld at 2012-05-23 14:45:07:
我做出来了，你不想告诉就不告诉，留着自己慢慢用

文献多的是！你用不着狂！！
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19楼2012-05-24 23:58:01
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 547star at 2012-05-23 16:21:45:
楼上面那位北大博士,让我想起那位发沈同笔记"上官婉儿"...

算你猜对了！
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20楼2012-05-24 23:58:25
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