| 查看: 2399 | 回复: 7 | |||
[交流]
【求助/交流】急！如何分离未彻底破碎的细胞及包涵体？
|
|
大肠杆菌诱导表达后，重组蛋白有部分可溶，部分不可溶；而超声破碎率无法达到100%，因此当离心后，沉淀部分既有不可溶蛋白，也有未破碎的细胞，如果不去除未破碎的细胞，通过SDS-PAGE看到的胞浆与沉淀的蛋白条带的比例就是不可信的。如何分离这两部分呢？ 以下是我目前的实验操作： 1. 100mL菌液，收集后用缓冲液浓缩为10mL左右（湿菌体密度50mg/mL），超声破碎条件（200w,5s,5s,30min)，10000g离心15min，上清与沉淀分别电泳检测。 结果：沉淀部分电泳后条带也很多较浓，与上清相似或稍浅些，按常理，大肠杆菌中的天然蛋白应该都是可溶的，所以沉淀中应该没有多少条带，由此，我推测超声破碎不彻底，有未破碎细胞混入。 2. 后来我又尝试将破碎后的菌体，3000g离心10min，取上清，再将上清，15000g离心10min，此时得到的上清和沉淀（非常少，几乎看不到）分别电泳检测， 结果：沉淀部分几乎没有条带，上清部分有条带，但是都比之前浅和很多。沉淀部分几乎没有条带说明几乎没有不可溶的重组蛋白，但这是不可能的，因为有许多文献报道这个蛋白在大肠杆菌中表达的大部分都是不可溶蛋白，少量是可溶的。所以我推测这次我又将不可溶蛋白和未破碎菌体都离心后去掉了。 请高人指点！ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有120人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 人体肾脏293细胞
已经有3人回复
- 293TP细胞
已经有9人回复
- 细胞壁的破碎
已经有4人回复
- 破碎细胞的各种方法
已经有9人回复
- 测定细菌细胞中的羟自由基应该用什么细胞破碎方法
已经有7人回复
- 【求助/交流】古细菌的细胞膜破碎（古细菌没有细胞壁）
已经有11人回复
- 【求助】小球藻（细胞壁）破碎方法
已经有11人回复
- 【求助/交流】蓝藻细胞破碎？
已经有6人回复
- 采购细胞破碎仪
已经有15人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
告别流水线爽文！108万字完结仙侠《女娲石之灵石奇缘（仙界篇）》值得细品
+1/9017
-
散金祈福
+5/1055
-
散金祈福
+3/774
-
华西生物制药研究院招聘科研助理
+2/398
-
面上第三年申请，改了一遍又一遍，希望能中啊！散金祈福！！！
+5/315
-
诚征另一半
+1/168
-
哈尔滨工业大学（校本部）电子与信息工程学院2027级博士招生
+1/63
-
面上基金祈福
+1/42
-
瑞典-博后-固态电池-粘结剂-锂离子电池方向
+1/33
-
中山大学化学工程与技术学院欧阳钢锋/吴鑫课题组博士生（2027年入学）/博士后招聘启事
+1/31
-
瑞典-博后-固态电池-粘结剂-锂离子电池方向
+1/31
-
强耀生物金秋开学季活动，2026年8月18日-10月31日，肽库筛选低至2W5
+3/28
-
坐标南京
+1/27
-
西安交通大学补亚忠课题组招聘2027博士生
+1/26
-
北理工集成电路杰青团队 | 诚招科助理
+1/10
-
pcold 原核表达载体
+1/8
-
上海大学王亮课题组诚招博士后（碳材料、光催化、电催化方向）
+2/8
-
北京理工大学-集成电路与电子学院杰青团队-招博士后
+1/8
-
祈祷老公中国基
+1/4
-
新审查指南施行半年，AI方向的专利申请是不是更看"技术味"了？
+1/2
天使托
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16299.3
- 帖子: 3659
- 在线: 290.6小时
- 虫号: 441757
2楼2011-01-10 17:07:20
brightfuture01
木虫之王 (文坛精英)
- MolEPI: 14
- 应助: 24 (小学生)
- 贵宾: 1.2
- 金币: 113340
- 帖子: 28966
- 在线: 3723.1小时
- 虫号: 464575
3楼2011-01-10 17:19:32
4楼2011-01-11 12:24:59
brightfuture01
木虫之王 (文坛精英)
- MolEPI: 14
- 应助: 24 (小学生)
- 贵宾: 1.2
- 金币: 113340
- 帖子: 28966
- 在线: 3723.1小时
- 虫号: 464575
5楼2011-01-11 12:29:29
6楼2011-01-11 18:47:57
7楼2011-01-11 18:49:18
8楼2012-02-28 21:31:46
