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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 破碎细胞的各种方法
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光2012

新虫 (初入文坛)

[求助] 破碎细胞的各种方法

本人欲测定胞内代谢的有机酸，但是由于能力所限，找不到相关的文献和资料参考，主要需要破碎细胞的各类详细方法，望各位虫友指教。
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1楼 2011-11-01 17:37:11
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光2012

新虫 (初入文坛)
错了，是胞内有机酸
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2楼2011-11-01 17:38:09
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yang0071

木虫 (职业作家)
★
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流！ 2011-11-01 19:49:21
超声
弱去污剂
强去污剂
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3楼2011-11-01 17:51:14
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虚灵子

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
adslye(金币+1): 鼓励交流~ 2011-11-02 09:45:23
光2012(金币+2): 我需要有机酸细胞破碎方面的资料，不过，还是谢谢啦 2011-11-02 10:44:35
机械法：
（1）研磨法（2）组织捣碎器捣碎法
物理法：
（1）反复冻融法（2）超声波处理法（3）压榨法（4）冷热交替法
化学与生物化学法：
（1）自溶法（2）溶胀法（3）酶解法（4）有机溶剂处理法
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4楼2011-11-01 20:16:11
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乘风浮云

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

光2012(金币+5): 2011-11-03 09:59:39
我破碎细胞用的是溶菌酶和超声波细胞破碎仪结合使用的方法破碎菌体。溶菌酶的添加量为0.1 g/100 mL菌悬液，待溶菌酶完全溶解后，置于35℃摇床培养箱160 r/min 破除细胞壁2 h。然后，使用超声波细胞破碎仪辅助破碎菌体，其工作参数为：功率600 w，超声时间5 min，工作2 s，间歇2 s，同时菌悬液要冰浴，以免温度过高，影响酶的活性。采用革兰氏染色法检测菌体是否破碎。这要看你是什么菌体啦，要是真核细胞，应该更好破碎的！最近看的一篇英文文献，是菌悬液冻融后，等体积TEA缓冲液稀释，在4度下用French pressure cell 下破碎的，压力位60MPa。多找找应该可以找到的，实在找不到直接相关的步骤，就用别人的一些方法，尝试看看用在自己试验中验证下可不可行。
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5楼2011-11-02 11:00:35
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
看天(金币+1): 鼓励 2011-11-09 17:04:34
细胞的用ripa裂解试试看
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6楼2011-11-02 14:43:27
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touniu2010

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
看天(金币+1): 鼓励 2011-11-09 17:04:24
我做酵母，破的时候用直径为100微米的玻璃粉在振荡器上震
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7楼2011-11-03 17:09:14
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xiaohaozi9876

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
看天(金币+2): 鼓励 2011-11-09 17:04:41
1.如果是gram-negative，则使用solvents或是detergents，比较容易。
2.如果是gram-positive，则使用lysozyme，再借助物理方法，如sonication或加入稳定性颗粒进行vibration。

反正注意点就是不要破坏胞内有机酸就行
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Onceinamoment,wethinkoneselfgrowup,oneday,wefinallyfound...
8楼2011-11-04 17:48:12
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baodongq

禁虫 (正式写手)
光2012(金币+3): 2011-11-09 16:41:08
本帖内容被屏蔽
9楼2011-11-09 13:01:56
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程xz777

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 乘风浮云 at 2011-11-02 11:00:35
我破碎细胞用的是溶菌酶和超声波细胞破碎仪结合使用的方法破碎菌体。溶菌酶的添加量为0.1 g/100 mL菌悬液，待溶菌酶完全溶解后，置于35℃摇床培养箱160 r/min 破除细胞壁2 h。然后，使用超声波细胞破碎仪辅助破碎菌 ...

您好，我最近要做单细胞藻的破壁，请问您上述的方法能用与藻的破壁吗？请教，期待回复。
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10楼2019-09-01 20:51:42
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