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破碎细胞的各种方法
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| 本人欲测定胞内代谢的有机酸，但是由于能力所限，找不到相关的文献和资料参考，主要需要破碎细胞的各类详细方法，望各位虫友指教。 |
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4楼2011-11-01 20:16:11
错了，是胞内有机酸 2楼2011-11-01 17:38:09
yang0071
木虫 (职业作家)
- BioEPI: 2
- 应助: 207 (大学生)
- 金币: 1573.4
- 散金: 9319
- 红花: 21
- 帖子: 4041
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- 虫号: 50941
- 注册: 2004-07-15
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
3楼2011-11-01 17:51:14
【答案】应助回帖
光2012(金币+5): 2011-11-03 09:59:39
| 我破碎细胞用的是溶菌酶和超声波细胞破碎仪结合使用的方法破碎菌体。溶菌酶的添加量为0.1 g/100 mL菌悬液，待溶菌酶完全溶解后，置于35℃摇床培养箱160 r/min 破除细胞壁2 h。然后，使用超声波细胞破碎仪辅助破碎菌体，其工作参数为：功率600 w，超声时间5 min，工作2 s，间歇2 s，同时菌悬液要冰浴，以免温度过高，影响酶的活性。采用革兰氏染色法检测菌体是否破碎。这要看你是什么菌体啦，要是真核细胞，应该更好破碎的！最近看的一篇英文文献，是菌悬液冻融后，等体积TEA缓冲液稀释，在4度下用French pressure cell 下破碎的，压力位60MPa。多找找应该可以找到的，实在找不到直接相关的步骤，就用别人的一些方法，尝试看看用在自己试验中验证下可不可行。 |
5楼2011-11-02 11:00:35
