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没有烟总有花新虫 (初入文坛)
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[求助]
包涵体洗涤后8M尿素不溶解
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| 包涵体洗涤后8M尿素不溶解 用了6M的盐酸胍，但是后期要复性 这个蛋白疏水性也不强 二硫键就一对 有3个半胱氨酸 分子量大小是86KD 为什么那么难溶解呢 ？如果用盐酸胍是不是后期的复性比较困难，求助。。。 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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2楼2011-06-22 16:48:27
3楼2011-06-22 16:53:34
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 高人啊 2011-06-23 14:46:01
西瓜(金币+5, EPI+1): 高人啊 2011-06-23 14:46:01
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从你的描述来看，包涵体难溶可能是和蛋白过大有关，解决方法很多，除了盐酸胍外，还可尝试： 1、从表达方面：诱导表达的时候菌液不要太浓，诱导温度低一点，诱导剂量减少一些，表达时间适当延长，因为慢表达才能让你的蛋白有更多的资源用在表达后的折叠上，尽量去避免形成太“结实”的包涵体； 2、最直接最好用的方法：包涵体溶到8M尿素里后冰浴再打个5-10分钟的超声，我遇到的大多数“顽固”包涵体都会溶解的，从超声仪里拿出来就可以直接看到不溶的包涵体变得澄清了。试试看吧。 |
4楼2011-06-22 22:25:51
gwbk
木虫 (正式写手)
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5楼2011-06-23 01:02:34
6楼2011-06-23 11:38:44
永峰1230
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7楼2014-03-16 15:57:13
8楼2014-07-08 16:13:52