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susanbao

铁虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 高手啊 2011-06-22 17:00:57
没有烟总有花(金币+2): 2011-06-24 11:44:14

破碎的包含体不洗，直接溶。先用少量水把包含体和成稀泥，在加尿素，适当加2mM DTT或5mM 2-MEP，应该可以熔的

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3楼2011-06-22 16:53:34

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zsy1106

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 高人啊 2011-06-23 14:46:01

从你的描述来看，包涵体难溶可能是和蛋白过大有关，解决方法很多，除了盐酸胍外，还可尝试：
1、从表达方面：诱导表达的时候菌液不要太浓，诱导温度低一点，诱导剂量减少一些，表达时间适当延长，因为慢表达才能让你的蛋白有更多的资源用在表达后的折叠上，尽量去避免形成太“结实”的包涵体；
2、最直接最好用的方法：包涵体溶到8M尿素里后冰浴再打个5-10分钟的超声，我遇到的大多数“顽固”包涵体都会溶解的，从超声仪里拿出来就可以直接看到不溶的包涵体变得澄清了。试试看吧。

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4楼2011-06-22 22:25:51

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