应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 包涵体洗涤后8M尿素不溶解
81/1返回列表
查看: 4139  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看

没有烟总有花

新虫 (初入文坛)

[求助] 包涵体洗涤后8M尿素不溶解

包涵体洗涤后8M尿素不溶解 用了6M的盐酸胍，但是后期要复性 这个蛋白疏水性也不强 二硫键就一对 有3个半胱氨酸 分子量大小是86KD 为什么那么难溶解呢 ？如果用盐酸胍是不是后期的复性比较困难，求助。。。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-22 11:42:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gppwfh

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励应助 2011-06-22 16:59:42
你在室温放置了多久？我们都放置半小时
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-06-22 16:48:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susanbao

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 高手啊 2011-06-22 17:00:57
没有烟总有花(金币+2): 2011-06-24 11:44:14
破碎的包含体不洗，直接溶。先用少量水把包含体和成稀泥，在加尿素，适当加2mM DTT或5mM 2-MEP，应该可以熔的
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-06-22 16:53:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zsy1106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 高人啊 2011-06-23 14:46:01
从你的描述来看，包涵体难溶可能是和蛋白过大有关，解决方法很多，除了盐酸胍外，还可尝试：
1、从表达方面：诱导表达的时候菌液不要太浓，诱导温度低一点，诱导剂量减少一些，表达时间适当延长，因为慢表达才能让你的蛋白有更多的资源用在表达后的折叠上，尽量去避免形成太“结实”的包涵体；
2、最直接最好用的方法：包涵体溶到8M尿素里后冰浴再打个5-10分钟的超声，我遇到的大多数“顽固”包涵体都会溶解的，从超声仪里拿出来就可以直接看到不溶的包涵体变得澄清了。试试看吧。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-06-22 22:25:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gwbk

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zsy1106 at 2011-06-22 22:25:51:
从你的描述来看，包涵体难溶可能是和蛋白过大有关，解决方法很多，除了盐酸胍外，还可尝试：
1、从表达方面：诱导表达的时候菌液不要太浓，诱导温度低一点，诱导剂量减少一些，表达时间适当延长，因为慢表达才能 ...

你说的是超声破碎仪？时间间隔怎么设置？
赞一下 回复此楼
5楼2011-06-23 01:02:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zsy1106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 热心 2011-06-23 14:46:20
引用回帖:
Originally posted by gwbk at 2011-06-23 01:02:34:
你说的是超声破碎仪？时间间隔怎么设置？

对，就是你破碎菌体时用的超声破碎仪，打2s停5s，记得冰浴哦。
我的顽固包涵体都是这么处理的，楼主可以先取少量包涵体这么做试试看，祝楼主好运！
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-06-23 11:38:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zsy1106 at 2011-06-22 22:25:51
从你的描述来看，包涵体难溶可能是和蛋白过大有关，解决方法很多，除了盐酸胍外，还可尝试：
1、从表达方面：诱导表达的时候菌液不要太浓，诱导温度低一点，诱导剂量减少一些，表达时间适当延长，因为慢表达才能让 ...

请问，，包涵体----是通过 菌液离心获得菌体 然后 破碎后离心的沉淀-再加8M尿素吗
赞一下 回复此楼
12
7楼2014-03-16 15:57:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ybdx

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by susanbao at 2011-06-22 16:53:34
破碎的包含体不洗，直接溶。先用少量水把包含体和成稀泥，在加尿素，适当加2mM DTT或5mM 2-MEP，应该可以熔的

沸水浴后，直接上样，还是离心上样 ，有什么区别？
赞一下 回复此楼
8楼2014-07-08 16:13:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 没有烟总有花 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 基金啊基金 +3 longfie172 2026-08-20 3/150 2026-08-21 00:04 by wuchongjun
[基金申请] 科研孤儿太难了 +14 我4大白菜 2026-08-20 15/750 2026-08-20 22:33 by 袁向阳007
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +8 大萍1987 2026-08-20 10/500 2026-08-20 21:48 by 大萍1987
[基金申请] 言之凿凿，明天官网会通知放榜？ +15 医学老男孩 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:35 by CaoLG
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭